Efecto de la LDL-oxidada en la hiperplasia prostática benigna: rol de las vesículas extracelulares en la modulación de la proliferación celular

Resumen

La Hiperplasia Prostática Benigna (HPB) se caracteriza por la proliferación descontrolada de elementos principalmente estromales, resultado de la conjunción de múltiples factores fisiopatogénicos. Evidencias sugieren que un entorno pro-aterogénico contribuye al desarrollo y progresión de la HPB. Asimismo, el estado hiperproliferativo de la HPB requiere una coordinada comunicación entre los componentes celulares que mantienen un microambiente permisivo. En este sentido, evaluamos in vitro el efecto del estado pro‑aterogénico, simulado por LDL-oxidada (OxLDL), sobre células estromales prostáticas humanas (CEPH) y el rol de vesículas extracelulares (EVs) en la modulación de la proliferación celular.

Para ello, se realizaron cultivos primarios de CEPH a partir de muestras de pacientes (n=4) del Sanatorio Allende de la ciudad de Córdoba y con aprobación del Comité de Bioética del Sanatorio Allende. Todos los ensayos realizados se llevaron a cabo por triplicado y se aplicó la prueba estadística t de Student para el análisis de resultados. Las CEPH fueron estimuladas durante 24h con OxLDL [20μg/mL] y se observó mediante incorporación de BrdU e inmunocitoquímica de Ki‑67 que OxLDL aumentó significativamente la tasa de proliferación vs.  vehículo en CEPH (p<0.001). Asimismo, se aislaron EVs derivadas de CEPH expuestas a OxLDL mediante ultracentrifugación diferencial (pellet 150K).

Tras su análisis y contabilización por microscopía electrónica de transmisión, y la confirmación de la identidad de EVs mediante inmunomarcación de CD63 conjugado a oro coloidal, se determinó que OxLDL incrementó hasta 10 veces la liberación de EVs; especialmente en la fracción de 15-60 nm que corresponde a exosomas vs. control (p<0.001). También, se estudió la participación de EVs en la proliferación celular utilizando como estímulo las EVs obtenidas de CEPH previamente tratadas con OxLDL [20μg/mL] por 24h vs. control, sobre CEPH y células epiteliales de la línea PC3. Posteriormente, se evaluó la proliferación inducida por EVs de manera autocrina y paracrina, respectivamente. EVs derivadas de CEPH en contextos pro‑aterogénicos aumentaron significativamente la proliferación en CEPH y PC3, evaluadas mediante Ki‑67 (p<0.01).

Estos resultados confirman el efecto patogénico de OxLDL sobre el crecimiento anómalo de la próstata, promoviendo una mayor liberación de EVs y un aumento en la tasa de proliferación celular.