Expresión de miR-21 y miR-let-7a en células estromales y vesículas extracelulares prostáticas de pacientes con hiperplasia prostática benigna

Resumen

Nuestro grupo demostró que células prostáticas de pacientes con hiperplasia prostática benigna (HPB) secretan vesículas extracelulares (EVs) con actividad pro-proliferativa, las cuales son incrementadas en contextos dislipidémicos. Uno de las principales cargas de las EVs, los microARNs (miRNAs), son elementos reguladores de la proliferación en distintas patologías, aunque su rol en la HPB en el entorno dislipidémico aún no está esclarecido. Por ello, evaluamos la expresión de dos miRNAs, con efectos opuestos descriptos, en células estromales prostáticas humanas (CEPH) en un contexto dislipidémico simulado por LDL‑oxidada (OxLDL), y en EVs derivadas de las CEPH estimuladas con OxLDL.

Se establecieron cultivos primarios de CEPH de pacientes con HPB sin alteraciones metabolicas (n=3). Los miRNAs analizados fueron el miR-21, con un atribuido efecto pro‑tumoral, y miR‑let-7a, con efecto protector. Los ensayos se realizaron por triplicado y se aplicó la prueba t-Student, comparando tratados con OxLDL vs. controles tratadsos con vehiculo. Primeramente, las CEPH fueron expuestas a OxLDL [20μg/mL] durante 24h y se evaluó la proliferación celular por inmunocitoquímica de Ki-67. Asimismo, se aislaron EVs de CEPH expuestas a OxLDL mediante ultracentrifugación diferencial (pellet 150K), se contabilizaron mediante microscopía electrónica de transmisión y se evaluó su participación en la proliferación sobre CEPH por Ki-67. OxLDL indujo un incremento en la proliferación celular y en el número de EVs liberadas.

Las EVs aisladas de CEPH tratadas con OxLDL aumentaron la proliferación celular (**p<0.01).  A partir de las CEPH expuestas a OxLDL y las EVs obtenidas, se evaluó la expresión relativa por RT‑qPCR utilizando el método ΔΔCt para miR-21 y miR-let-7a. La expresión de miR-21, usualmente sobreexpresado en contextos pro-proliferativos, disminuyó para los 3 individuos (**p<0.01), mientras que miR-let-7a de respuesta contraria, disminuyó en 2 de ellos vs. el control (**p<0.01). Si bien la expresión de ambos miRNAs varió entre los individuos, estas fueron similares entre las muestras de CEPH y EVs, sugiriendo que la carga de las EVs está relacionado directamente  al estímulo recibido por la célula.

En resumen, el papel del miR-21 no es concluyente en la HPB, mientras que la disminución del miR-let-7a inducida por OxLDL sugiere un papel protector para este miRNA en la proliferación de CEPH.