Obtención y caracterización de vesículas extracelulares a partir de células estromales prostáticas humanas derivadas de pacientes con hiperplasia prostática benigna

Resumen

La Hiperplasia Prostática Benigna (HPB) surge a consecuencia de la proliferación celular excesiva de la zona de transición prostática que comprime la uretra, provocando la sintomatología propia de la enfermedad. Evidencias sostienen que el entorno aterogénico podrían contribuir al desarrollo y progresión de la HPB, aumentando su incidencia y agresividad. El estado hiperproliferativo de la HPB requiere una coordinada comunicación entre los diferentes componentes que mantienen un microambiente permisivo. Así, las vesículas extracelulares (EVs) han tomado relevancia como reguladores de comunicación intercelular en múltiples procesos. Se ha descrito que la molécula de LDL-oxidada (OxLDL) estaría involucrada en diversas vías de señalización; incluida la señalización por EVs promoviendo la proliferación celular. Las EVs pueden contener diversas biomoléculas que les confieren funciones en comunicación intercelular y, además, se reportaron efectos proliferativos e inflamatorios mediados por EVs derivadas de distintos tipos celulares.

Es este contexto, propusimos como objetivos: 1) evaluar el efecto de OxLDL, simulando un estado aterogénico, sobre la proliferación celular en cultivos primarios de células estromales prostáticas humanas (HPSC) de muestras de pacientes (n=8) del Sanatorio Allende de Córdoba; 2) aislar EVs de cultivos primarios mediante ultracentrifugaciones diferenciales y analizar su producción y liberación al medio en tratamientos con OxLDL vs. vehículo; 3) caracterizar morfológicamente EVs mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM) y confirmar la identidad y presencia de exosomas, a través de inmuno-marcación de CD63 utilizando oro coloidal.

Se observó que OxLDL (20μM) produjo un aumento significativo en la tasa de proliferación celular respecto al vehículo. EVs fueron obtenidas mediante utracentrifugaciones diferenciales (pellets 2k, 10k, 150k) y visualizadas por TEM utilizando tinción negativa. Las HPSC de pacientes con HPB mostraron una frecuencia muy baja de EVs liberadas, con OxLDL induciendo un aumento de 10 veces, especialmente en la fracción 15-20nm (p<0,001). Ultraestructuralmente, estas EVs exhibieron una apariencia esférica y cóncava, compatible con exosomas; luego fueron verificados positivamente por inmuno-marcación de CD63.

Finalmente, podemos concluir que OxLDL favorecería la proliferación celular, incremento y liberación de EVs, las cuales participarían en comunicación celular y mantención del ambiente permisivo propicio para la progresión y aumento de agresividad de la HPB.