Influencia de moléculas coestimuladoras B7 colocalizadas en trampas extracelulares (ETs) en la expresión de CD45RO en cultivos autólogos humanos

Resumen

Las trampas extracelulares (ETs) son estructuras compuestas de cromatina, histonas y proteínas granulares y constituyen un mecanismo funcional microbicida de células inmunes. Se ha estudiado su participación en la fisiopatogenia de diversas patologías, entre ellas COVID-19, enfermedades autoinmunes y cáncer. Las moléculas coestimuladoras B7 (B7-1:CD80 y B7-2:CD86) brindan la segunda señal de activación para células T y su ausencia es un mecanismo de tolerancia periférica. Los objetivos fueron estudiar la influencia de las moléculas B7 colocalizadas en ETs generadas in vitro a partir de leucocitos sobre la expresión del antígeno común leucocitario CD45RO en cultivos celulares autólogos de sangre humana. Esta molécula es un marcador de activación de células T,  y  su expresión en neutrófilos, es relacionada a adhesión y activación.

Para ello nos propusimos generar y aislar ETs en cultivos autólogos de leucocitos expuestos a lipopolisacarido (LPS); marcar moléculas B7 en ETs aisladas y observar la expresión del correceptor CD4 y CD45RO en ensayos de interacción de ETs y leucocitos autólogos en cultivo. Se realizaron cultivos autólogos de leucocitos de muestras de sangre humana sana anticoagulada con heparina, (n = 10) (con consentimiento informado, Comité de Ética, HNC, FCM), estimulados con LPS para generación de ETs. Se realizó: aislamiento de ETs y ensayos de interacción ETs con cultivos autólogos. Inmunofluorescencia con anti-CD80, anti CD86, anti CD4 y anti CD45RO, tinción de ADN: DAPI. Controles: muestras de cultivos apareados. Cuantificación de células marcadas con programa FIJI. Tratamiento estadístico: test t para muestras apareadas.

A 24 horas de cultivo no se observaron diferencias significativas (p<0,05) en los porcentajes de células positivas para CD4 y CD45RO entre las muestras apareadas control y con agregado de ETs. A 72 horas se observaron diferencias significativas (p<0,05) en la expresión de CD45RO entre los controles y las muestras con agregado de ETs. En un donante se observaron diferencias significativas (p<0,05) en los porcentajes de células positivas para CD4.

La presencia de moléculas B7 en ETs podría dar la segunda señal requerida para la activación de linfocitos T autorreactivos presentes en el cultivo autólogo de leucocitos totales implicando la posibilidad de ruptura de autotolerancia.