CD45RO y dinámica mitocondrial en cultivos de leucocitos autólogos humanos estimulados in vitro.

Resumen

Los fenotipos adoptados por las células inmunitarias en sus respuestas están influenciados por la "dinámica mitocondrial" (DM): conjunto de características de forma, posición y tamaño de las mitocondrias. Estos orgánulos se consideran actualmente con funciones reguladoras de la inmunidad innata y adaptativa. Los linfocitos T intervienen en la respuesta adaptativa y al activarse expresan la molécula marcadora CD45RO. La endotoxemia producida por endotoxinas como el lipopolisacárido (LPS) en la circulación sanguínea conducen a inflamación en múltiples órganos. Los linfocitos T responden innatamente al LPS con señalización vía el receptor TLR4, no afecta la proliferación, ni la secreción de citoquinas pero aumenta la adherencia e inhibe su migración. Los objetivos del presente trabajo fueron observar las características morfológicas de las mitocondrias en linfocitos en cultivos de leucocitos expuestos a LPS,  péptidos formilados (fMLP) u ovoalbúmina (OVA) y marcar CD45RO en ensayos con LPS u OVA.

Se estimularon cultivos autólogos de leucocitos de muestras de sangre humana sana (n = 10) con consentimiento ético (HNC, FCM), anticoagulados con heparina, con 25 ng/ml de LPS o 0,25 ng/ml de fMLP o 100 ug/ml de OVA, por 30 minutos. Técnica de inmunofluorescencia con anti-CD45RO, tinción de ADN con DAPI. Muestras de sangre apareadas proporcionaron los controles. Se estudiaron las células de los cultivos con microscopía electrónica de transmisión.

Se observaron alteraciones de la morfología mitocondrial de los linfocitos en las muestras con LPS con un aumento en el tamaño de las mitocondrias y la complejidad de las crestas con imágenes electrolúcidas (prueba t para muestras apareadas, p <0,0001). Se observaron diferencias significativas de las áreas mitocondriales aumentadas en el ensayo con OVA (p <0,005) no así en el ensayo con fMLP. Se observó positividad incrementada para CD45RO en ensayos con LPS (p<0,005) u OVA (p<0,0001) con respecto a las muestras apareadas sin estimulación. 

El aumento del área mitocondrial se ha relacionado con activación temprana de células T en el ensayo con OVA, coincidente con positividad de CD45RO.  Los diversos activadores influyen en la DM y en los fenotipos de las células inmunes y tal DM tiene importancia tanto en las funciones metabólicas como inmunes en dichas células.