Trampas extracelulares (ETs) autólogas influyen en perfiles de linfocitos T y no son factores de activación de macrófagos M1 humanos

Resumen

La formación de trampas extracelulares (ETs) es un mecanismo funcional microbicida de células inmunes importante por su implicancia en la patogenia de diversas enfermedades, incluida COVID-19. Nos propusimos estudiar la influencia de ETs sobre la diferenciación de perfiles de linfocitos y macrófagos humanos en cultivo autólogo. Los objetivos fueron a) provocar la generación de ETs in vitro con lipopolisacarido (LPS) o péptidos formilados fMLFN-formyl-met-leu-phe (fMLP) y su aislamiento;  b) provocar procesamiento y presentación del antígeno heterólogo ovoalbúmina (OVA) y c) marcar por inmunofluorescencia (IF) moléculas del perfil T CD4, células T helper Th17 y células linfoides innatas 3 ILC3 (factor de transcripción RORɣ, receptor nuclear huérfano); así como el antígeno común leucocitario CD45RO+ marcador de activación de células T y,  la molécula del perfil de activación clásica de macrófagos M1,  óxido nítrico sintetasa inducible (iNOS).

Se realizaron (n=10) cultivos celulares autólogos de leucocitos totales de sangre periférica humana sana (donada por IHH, UNC, con aprobación Ética, HNC, FCM, UNC) que fueron desafiados con OVA, y sometidos al stock de ETs autólogas. Controles: muestras apareadas sin desafío. Se tomaron muestras a 24 y 72 h. IF con anti-RORɣ, anti-CD4, anti-CD45RO, anti-NOS2 y tinción de ADN con DAPI. Cuantificación de células marcadas con programa FIJI. Tratamiento estadístico: test t para muestras apareadas.

A 24 hs se observaron diferencias significativas en los porcentajes de células positivas para CD4 y CD45RO entre  muestras apareadas control y con desafío de OVA, (*p<0,05) y entre muestras apareadas control y con agregado de OVA y ETs (*p<0,05). En un experimento independiente se observaron diferencias significativas entre las estimuladas con OVA vs aquellas estimuladas con OVA y agregado de ETs (*p<0,05). A 72 hs de cultivo no se hallaron diferencias significativas entre las muestras apareadas en ningún caso. No hubo diferencias significativas tanto a 24 como a 72 hs de cultivo en los porcentajes de células positivas para RORɣ ni en los porcentajes de células positivas para iNOS en los diferentes desafíos. 

Se observó influencia de las ETs en la activación celular T y los componentes de las ETs autólogas no provocaron activación clásica de macrófagos M1.