Influencia de trampas extracelulares (ETs) autólogas en sinapsis inmunes en cultivos de leucocitos humanos desafiados con antígeno heterólogo ovoalbúmina (OVA)

Resumo

Las trampas extracelulares (ETs) producidas por células inmunes son un mecanismo de defensa frente a microorganismos patógenos y están constituidas por cromatina, histonas, proteínas granulares, entre ellas mieloperoxidasa (MPO) y otras moléculas tales como CMH-II y coestimuladoras B7.  Además, han sido implicadas en daño tisular, trombosis, autoinmunidad, cáncer y en la patogenia de COVID-19. Aquí se propuso aislar ETs generadas in vitro a partir de leucocitos humanos totales extraídos de sangre periférica estimulados con lipopolisacárido (LPS) y estudiar su influencia en la generación de sinapsis inmunes (SIs) en cultivos autólogos sometidos al desafío con el antígeno heterólogo ovoalbúmina (OVA).

Se realizaron cultivos autólogos de leucocitos de muestras de sangre humana sana anticoagulada con heparina, (n = 10 donadas por IHH, UNC) con consentimiento informado (Comité de Ética, HNC, FCM) estimulados con LPS para generación de ETs y posterior aislamiento. Controles: muestras de cultivos apareados. Se marcaron por inmunofluorescencia moléculas de células presentadoras de antígenos (CPAs) y de linfocitos en el fenómeno de rosetas macrófago-linfocitarias (RML) de múltiples SIs. Cuantificación de células marcadas con programa FIJI y de RMLs. Tratamiento estadístico: test t para muestras apareadas. 

A 24 horas de cultivo se observó un menor grado de formación de RMLs en cocultivos con ETs generadas (p<0.05). A 96 horas de cultivo con agregado de ETs aisladas y OVA se observó un mayor porcentaje de formación de RMLs (p<0.05). Se observó un menor porcentaje de células marcadas MPO y HLA-DR positivas con agregado de OVA a 24 horas de cultivo (p<0.05). En cocultivos a 24 horas se manifestó un mayor porcentaje de células MPO positivas con OVA y ETs generadas (p<0.05).

Además de las ETs, el estímulo con LPS para su generación puede tener influencia en la producción de MPO libre en el medio de cultivo que puede ser internalizada por las células y contribuir a la positividad observada. Con el agregado de OVA y ETs aisladas, se observó aumento de SIs, aunque las ETs pueden obstaculizar la SI, ya que si bien portan moléculas importantes para la presentación antigénica, pueden también interferir en el contacto célula-célula requerido para la SI.