Validación de un método de análisis de imagen digital para cuantificar tinción citoplasmástica por inmunohistoquímica en tumores hipofisarios

Resumen

La evaluación visual de la tinción citoplasmática por inmunohistoquímica (IHQ) realizada por patólogos muestra alta variabilidad, es subjetiva, consume tiempo y provee datos cualitativos o semicuantitativos. Además, en muestras de tumores hipofisarios se suman desafíos debido al reducido tamaño, presencia de coágulos y desgarramientos del tejido, por la extracción quirúrgica transesfenoidal, lo que dificulta la identificación de células individuales, necesaria para métodos visuales. Los métodos de análisis digital que se basan la detección de las intensidades de los píxeles del cromógeno mejoran la detección de tinciones débiles y producen datos continuos en lugar de cualitativos. El objetivo fue validar un método de análisis de imagen digital para cuantificar tinción citoplasmática por IHQ en tumores hipofisarios.

Micrografías de secciones de tejido de tumores hipofisarios, con IHQ para FGFR1 reveladas con DAB (marca citoplasmática) fueron analizadas. Los criterios de evaluación de la tinción IHQ se establecieron junto con una patóloga, quien realizó tres evaluaciones visuales con un intervalo de dos semanas, clasificando la expresión del biomarcador en nula, débil, moderada o alta. La cuantificación digital fue realizada por dos observadores de manera independiente mediante ImageJ (plugin IHC-Toolbox), generando un archivo con un histograma para conservar píxeles positivos. Se evaluó la variabilidad intra-observador del método visual mediante la prueba de Kappa-Fleiss (κ) y la inter-observador del método digital con el Coeficiente de Correlación Intraclase (ICC). Se empleó ANOVA-Tukey para verificar la capacidad del método digital de distinguir entre las categorías del método visual. Para establecer rangos del método digital, se definieron puntos de corte mediante análisis exploratorio y validados con índice Youden (J).

La concordancia intra-observador del método visual fue moderada/alta (expresión nula, κ=0,96; débil, κ=0,76; intermedia, κ=0,65; alta, κ=0,87). El análisis digital mostró concordancia inter-observador buena (ICC=0,95). El método digital pudo diferenciar entre las categorías cualitativas (p<0,05), estableciéndose los rangos de expresión nula ([0-20), J=0,98); débil ([20-60), J=0,80); moderada ([60-90), J=0,72) y fuerte (≥90, J=0,76).

La cuantificación digital, de la tinción citoplasmática por IHQ, podría ser una alternativa rápida, precisa y reproducible. La misma se correlaciona con la categorización del patólogo y permite la conversión de datos cualitativos a cuantitativos.