Efecto sinérgico de clomipramina y anfotericina sobre promastigotes de Leishmania amazonensis

Resumo

La búsqueda de nuevas terapias involucra el uso de combinaciones de fármacos (F) efectivos para afecciones de similar biología patógeno-huésped y con blancos moleculares presentes en el parásito, pero ausentes en el huésped, como la tripanotiona reductasa en parásitos del género Leishmania. Un F inhibidor de esta enzima es la clomipramina (Clo), empleado por su acción antidepresiva. Las formulaciones comerciales de los F traen asociadas excipientes, que pueden ser eliminados mediante métodos sencillos y lograr así su purificación. El objetivo de este trabajo se centró en analizar la terapia combinada “in vitro” de Anfotericina-B (Anf) y Clo purificada sobre promastigotes de L. amazonensis.

Se realizó la purificación de Clo teniendo en cuenta su alta solubilidad en diclorometano. Se incubaron 3x10⁶ promastigotes/mL con concentraciones de los F solos (n=3) y combinados (n=3) (Anf=0,02-0,62 μg/mL y Clo=0,48-15,6 μg/mL). Luego de 72 h, se realizó el recuento de parásitos y se determinó la concentración inhibitoria del 50% (CI50) y el Índice de Combinación (IC: IC>1 antagónico; IC=1 aditivo; IC<1 sinérgico). Asimismo, se realizó el isobolograma correspondiente a los valores de CI50 de cada uno de los F y de sus combinaciones.  La comparación de los tratamientos se realizó con un ANOVA y el test post hoc de Bonferroni.

Los valores de CI50 de cada F fueron: Anf=0,28 μg/ml y Clo=1,27 μg/ml, siendo significativamente menores que la concentración citotóxica en Células Vero. De las concentraciones estudiadas, la combinación de Clo con 0,02 (CI50=1,11 μg/ml); 0,04 (CI50=0,80 μg/ml) y 0,08 (CI50=0,78 μg/ml) de Anf se ubicaron por debajo de la línea de aditividad, evidenciando un efecto sinérgico. Estos datos fueron coincidentes con los valores de IC obtenidos para cada concentración respectivamente: 0,95; 0,78 y 0,89.

La utilización del F purificado mejoró el efecto antiparasitario permitiendo reducir la concentración de Clo. El efecto sinérgico observado es coincidente con los resultados hallados en estudios previos en Trypanosoma cruzi y L. braziliensis.