Del análisis in silico a la validación experimental. Estudio de dos mutaciones causantes de la enfermedad poco frecuente CLN7

Resumen

La enfermedad poco frecuente CLN7 (OMIM #610951) es una forma de Lipofuscinosis Ceroidea Neuronal, neurodegenerativa, de almacenamiento lisosomal, que afecta principalmente a niños. CLN7 es causada por alteraciones en el gen MFSD8/CLN7, encargado de codificar la proteína de membrana lisosomal MFSD8/CLN7, caracterizada por un fenotipo infantil tardío donde los primeros síntomas (convulsiones, deterioro psicomotor, ocasional pérdida de visión) aparecen entre los 1,5 y 6 años. Hasta el momento, la única herramienta diagnóstica es el análisis genético acompañado del estudio predictivo de las variantes detectadas con análisis bioinformático. Esto suele considerarse suficiente para el diagnóstico, sin realizar análisis experimentales que confirmen lo predicho.

En el Programa de Investigación Traslacional NCL de Córdoba se registraron cinco casos CLN7 y sus respectivas variantes genéticas: dos de ellas exónicas (E3 c.103C>T, p.Arg35*, E13 c.1394G>A, p.Arg465Gln), ya registradas en otros casos y corroboradas experimentalmente; mientras que las otras dos variantes son intrónicas (I9 c.863+1G>A, p.?; I9 c.863+4A>G, p.?), registradas también en otros pacientes pero aún sin validación experimental. El presente trabajo propone dar a conocer las características clínicas de cinco casos CLN7 y estudiar de manera experimental las dos mutaciones intrónicas no validadas.

Se realizó un análisis in silico acompañado de un estudio in vitro, que consistió en un análisis de expresión utilizando un reportero de splicing (pSPL3). Las variantes ubicadas a nivel de exón se clasificaron como “patogénicas” y las variantes intrónicas (posibles causantes de pérdida del dador de splicing), una se clasificó como “patogénica” y la otra de “significado incierto”. A través del ensayo con pSPL3 se corroboró que ambas variantes afectan al splicing produciendo la pérdida el exón 9, lo que impactaría en MFSD8/CLN7 al modificarse el marco de lectura y la consecuente aparición de un codón de stop temprano.

Se destaca la relevancia del presente trabajo ya que permite ampliar lo que se conoce hasta el momento de la enfermedad poco frecuente CLN7 tanto a nivel clínico como genético, confirmando de manera experimental el efecto de dos mutaciones causantes de esta enfermedad.

*Los adultos responsables firmaron un consentimiento informado aprobado por el CIEIS-Polo Hospitalario de la Provincia de Córdoba.