Efecto del silenciamiento del gen reloj period en el vector de la enfermedad de Chagas Triatoma infestans

Resumo

El vector de la enfermedad de Chagas Triatoma infestans muestra ritmos diarios controlados por los genes del reloj biológico. La interferencia por ARN (ARNi) es un mecanismo de silenciamiento génico que interrumpe la expresión de genes específicos. Para el silenciamiento del gen reloj period (per) se utilizaron protocolos de ARNi con diferentes esquemas de alimentación y se analizó el efecto del silenciamiento en su perfil de expresión diario en tejido nervioso de T. infestans.

Los ARNi del gen per y del gen control β-Lactamasa (β-Lac) se inyectaron en ejemplares adultos y se realizaron disecciones cada 6 hs durante un período de 24 hs. La hora del día fue expresada en Zeitgeber Time (ZT).  Se utilizaron pooles de 3 individuos y 3 replicas experimentales por cada ZT.  En cada grupo se determinó la expresión del gen per mediante la técnica de Retrotranscripción y PCR en Tiempo Real (RT-qPCR).  Los resultados se analizaron mediante tests de ANOVA (One-way ANOVA) seguidos del Test de Bonferroni (de comparación múltiple).

El silenciamiento del gen per en machos y hembras de T. infestans mostró una disminución significativa en la expresión transcripcional en el grupo de insectos inyectados con el ARNi del gen per con respecto a los niveles hallados en los grupos control (no inyectados e inyectados con el ARNi para el gen β-Lac). Los esquemas de alimentación utilizados en los protocolos no afectaron de forma significativa el nivel de interferencia. Por otra parte, el silenciamiento del gen per redujo su expresión en todos los ZT analizados y no se observaron las variaciones diarias características en la expresión a nivel transcripcional que presenta este gen reloj.

Los resultados obtenidos permitieron establecer que el silenciamiento del gen per fue efectivo tanto en machos como en hembras y no se ve afectado por los esquemas de alimentación utilizados en los protocolos de interferencia. Por otra parte, el silenciamiento del gen per afectó el perfil de expresión del gen reduciendo a la mitad su expresión en todos los ZT analizados.