Dinámica mitocondrial, beta-tubulina y trampas extracelulares en cultivos autólogos de leucocitos humanos estimulados con LPS

Abstract

La endotoxemia producida por los efectos de endotoxinas tales como LPS (lipopolisacaridos) en la circulación sanguínea lleva a la inflamación en múltiples órganos. Las trampas extracelulares (TEs) son estructuras de cromatina y proteínas intracelulares las cuales son extruidas en leucocitos en condiciones inflamatorias.  Algunos componentes proteicos del citoesqueleto han sido descriptos en las trampas, pero la presencia de beta-tubulina no ha sido reportado. No todas las TEs son creadas igual, esto depende de la fuente de estimulación. Las mitocondrias son consideradas actualmente con funciones reguladoras de la inmunidad innata y adaptativa y son determinantes en los fenotipos que adoptan las células inmunes en sus respuestas. Objetivos: generar TEs en cultivos de leucocitos desafiados con LPS y realizar el marcado de beta-tubulina y por otra parte, observar las características morfológicas de las mitocondrias en linfocitos en el ensayo con LPS. 

Cultivos autólogos a partir de muestras de sangre humana sana (n=10) con consentimiento ético (HNC, FCM), anticoagulada con heparina fueron estimulados con 25ng/ml LPS, 30 minutos. Técnica de inmunofluorescencia con anticuerpos anti-beta tubulina, tinción DNA con DAPI. Muestras sanguíneas apareadas proveyeron los controles. Sedimentos celulares de los cultivos fueron estudiados con microscopia electrónica de transmisión.

Moléculas de beta-tubulina fueron localizadas en las TEs. Se observó alteración de morfología mitocondrial de linfocitos en las muestras con LPS con incremento en tamaño y complejidad de las crestas con imágenes electrolúcidas (test t para muestras apareadas, p<0,001).

La expresión de beta-tubulina aporta al mejor entendimiento de la composición de las TEs generadas por LPS y puede tener significancia como blanco terapéutico. Esto es similar en las TEs gatilladas por diferentes estímulos?  Los cambios en la morfología de las mitocondrias conducen al mejoramiento o al deterioro de las funciones linfocitarias? Ulteriores experimentos son necesarios para dilucidar esto.