Evaluación de la macroautofagia en un modelo experimental símil nefritis lúpica

Resumen

El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmunitaria compleja y frecuente, presentándose con nefritis lúpica (NL) en 30-60% de los pacientes. La macroautofagia, mecanismo de degradación de contenidos intracelulares, se encuentra desregulada en numerosas enfermedades metabólicas, neurodegenerativas, cáncer y autoinmunes. Si bien se ha demostrado que la autofagia está involucrada en su patogénesis, en qué medida se encuentra presente en los órganos blanco sigue siendo incierto. Nos propusimos analizar y describir la presencia de macroautofagia en un modelo experimental símil-NL.

Se utilizaron ratones macho y hembra knockout para Galectina-3 de 8 meses de edad (n:6 por cada sexo), en quienes se han descripto ANAs y compromiso funcional renal (proteinuria e incremento de creatinina), siendo los controles (C) ratones de ambos sexos de la cepa B6 (n:6 por sexo). Las metodologías utilizadas para la evaluación de la macroautofagia fueron: microscopía electrónica de transmisión (fijador Karnovsky 4%, inclusión en resinas epoxi, contraste con metales pesados, observación en un microscopio electrónico Zeiss Leo 906-E) e inmunohistoquímica en parafina para Beclina-1 y LC3, determinándose el número de células inmunopositivas por túbulo, contándose entre 710 y 790 túbulos por grupo control y experimental. Estadística: media y DS, prueba de Mann-Whitney (dos grupos variable cuantitativa, no pareado, sin distribución normal). p<0.05. Protocolo aprobado por CICUAL-Universidad de San Martín.

La evaluación histopatológica demostró, tanto en ratones machos como hembras símil-NL, glomerulonefritis proliferativa mesangial mediada por complejos inmunes y nefritis tubulointersticial crónica. El análisis ultraestructural de los grupos experimentales, a diferencia del grupo control e independientemente del sexo, demostró elementos vesiculares en túbulos compatibles con vesículas macroautofágicas. Tanto Beclina-1 como LC3 se inmunodetectaron en el epitelio tubular renal, con un número de células inmunopositivas significativamente mayor en el modelo experimental símil-NL respecto del control (ejemplo Beclina 1 macho C:5±3; simil-NL:20±7*; hembra C:7±2; simil-NL:25±4**. *p<0,05 vs C y **p<0,05 vs C).

Podemos concluir que en modelo símil-NL el mecanismo de macroautofagia se encuentra incrementado respecto a los animales controles, posiblemente vinculado al estado proteinúrico propio de esta cepa, pudiendo además contribuir al daño intersticial crónico descripto.