Optimización de ensayos de inhibición de acetilcolinesterasa en Sitophilus zeamais (Mots.)
Palavras-chave:
Acetilcolinesterasa, insectos, inhibidores, insecticidas, metodologíaResumo
Los ensayos que miden la actividad de la enzima acetilcolinesterasa (AChE) actualmente son empleados en una amplia variedad de campos que van desde la medicina hasta el manejo integrado de plagas de insectos. De hecho, la mayoría de los insecticidas utilizados en el mundo se basan en inhibidores de esta enzima, como compuestos organofosforados y carbamantos. Los métodos empleados actualmente para testear la capacidad inhibidora de un compuesto se basan en la reacción de Ellman. Sin embargo, estas técnicas no llevan a cabo un seguimiento completo de la reacción en el tiempo, se basan en estimadores poco fiables y suelen requerir experimentos adicionales, como cuantificación de proteínas. Utilizando las ventajas de los nuevos aparatos de espectrofotometría desarrollamos una técnica para medir inhibición de la enzima AChE, basada en ensayos de microplaca con lecturas en simultáneo a lo largo de toda la reacción, junto con un nuevo método para el análisis e interpretación de los datos obtenidos. Este avance permitirá realizar este tipo de ensayos de forma más eficiente, rápida y confiable.
Downloads
Referências
[1] Anderson J.A. y Coats J.R. (2012), “Acetylcholinesterase inhibition by nootkatone and carvacrol in arthropods”, Pesticide Biochemistry and Physiology, 102: 124–128.
[2] Bocquené G., Galgani F. y Truquet P. (1990), “Characterization and Assay Conditions for Use of AChE Activity from Several Marine Species in Pollution Monitoring”, Marine Environmental Research, 30: 75-89.
[3] Cabezas-Herrera J., Campoy F.J. y Vidal C. (1992), “Differential effects of ethanol on membrana-bound and soluble acetylcholinesterase from sarcoplasm reticulum membranes”, Neurochemistry Research. 17: 717–722.
[4] Di Rienzo J.A., Casanoves F., Balzarini M.G., Gonzalez L., Tablada M. y Robledo C.W. (2016), “InfoStat versión 2016. Grupo InfoStat”, FCA, Universidad Nacional de Córdoba, Argentina. URL http://www.infostat.com.ar
[5] Ellman G.L., Courtney K.D., Valentino A. y Featherstone R.M. (1961), “A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity”, Biochemical Pharmacology, 7: 88-95.
[6] Eyer P. y Worek F. (2009), “The determination of human erythrocyte acetylcholinesterase (Ery-AChE) in a modified Ellman assay”, Clinical Toxicological Analysis, pp. 755-774.
[7] Fishel F. M. (2012), “Pesticidas y Colinesterasa”. Agronomy, Servicio de Extensión Cooperativa de la Florida, Instituto de Alimentos y Ciencias Agrícolas, Universidad de la Florida. (UF/IFAS), PI242.
[8] Guilhermino L., Barros P., Silva M.C. y Soares A.M.V.M. (1998), “Should the use of inhibition of cholinesterases as a specific biomarker for organophosphate and carbamate pesticides be questioned?”, Biomarkers, 3: 157- 163.
[9] Herrera J.M., Zunino M.P., Dambolena J.S., Pizzolitto R.P., Gañan N.A., Lucini E.I. y Zygadlo J.A. (2015a), “Terpene ketones as natural insecticides against Sitophilus zeamais”, Industrial Crops and Products, 70: 435–442.
[10] Herrera J.M., Pizzolitto R.P., Zunino M.P., Dambolena J.S. y Zygadlo J.A. (2015b), “Effect of fungal volatile organic compounds on a fungus and an insect that damage stored maize”, Journal of Stored Products Research, 62 : 74-80.
[11] Jukic M., Politeo O., Maksimovic M., Milos M. y Milos M. (2007), “In Vitro acetylcholinesterase inhibitory properties of thymol, carvacrol and their derivatives thymoquinone and thymohydroquinone”, Phytotherapy Research, 21: 259–261.
[12] Loizzo M.R., Menichini F., Conforti F., Tundis R., Bonesi M., Saab A.M., Statti G.A., De Cindio B., Houghton P.J.. Menichini F. y Frega N.G. (2009), “Chemical analysis, antioxidant, antiinflammatory and anticholinesterase activities of Origanum ehrenbergii Boiss and Origanum syriacum L. essential oils”, Food Chemistry, 117:174–180.
[13] López M.D. y Pascual-Villalobos M.J. (2010), “Mode of inhibition of acetylcholinesterase by monoterpenoids and implications for pest control”, Industrial Crops and Products, 31 : 284–288.
[14] Mata A.T., Proença C., Ferreira A.R., Serralheiro M.L.M., Nogueira J.M.F. y Araújo M.E.M. (2007), “Antioxidant and antiacetylcholinesterase activities of five plants used as Portuguese food spices”, Food Chemistry, 103: 778–786.
[15] Öztürk M. (2012), “Anticholinesterase and antioxidant activities of Savoury (Satureja thymbra L.) with identified major terpenes of the essential oil”, Food Chemistry, 134 : 48–54.
[16] Öztürk M., Kolak U., Topcu G., Oksuz S. y Choudhary I. (2011), “Antioxidant and anticholinesterase active constituents from Micromeria cilicica by radical-scavenging activity-guided fractionation”, Food Chemistry, 126 : 31–38.
[17] Picollo M.I., Toloza A.C., Mougabure Cueto G., Zygadlo, J. y Zerba, E. (2008), “Anticholinesterase and pediculicidal activities of monoterpenoids”, Fitoterapia, 79: 271–278.
[18] Pohanka M. (2011), “Cholinesterases, a target of pharmacology and toxicology”, Biomedical papers of the Medical Faculty of the University Palacky, Olomouc, Czechoslovakia, 155 (3): 219-230.
[19] Roberts J.R. y Reigart J.R. (2013), “Recognition and management of pesticide poisonings”. Environmental Protection Agency (EPA). United States Environmental Protection Agency. Office of Pesticide Programs. Sixth Edition.
[20] Tecles F. & Cerón J.J. (2003). “Determinación espectrofotométrica de colinesterasa en sangre entera de animales domésticos: factores pre y analíticos”. Anales de Veterinaria, Murcia 19: 61-76.
[21] Tecles F.; Gutierrez-Panizo C.; Martínez-Subiela S.; Cerón J.J. (2002). “Effects of different variables on whole blood cholinesterase analysis in dogs”. Journal of Veterinary Diagnosis Investigation. 14:132–139.
[22] Tecles F., Martínez-Subiela S. y Cerón J.J. (2001), “Influencia de diversas condiciones analíticas en la determinación de colinesterasa en sangre entera mediante el método de Ellman”, Anales de Veterinaria de Murcia, 17: 67-80.
[23] Walmsley T.A., Abernethy M.H. y Fitzgerald H.P. (1987), “The effect of daylight on the reaction of thiols with Ellman‘s DTNB reagent [5, 5‘-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)]”, Clinical Chemistry, 33: 1928-9.
[24] Yeom H., Kang J.S., Kim G. y Park I. (2012), “Insecticidal and Acetylcholine Esterase Inhibition Activity of Apiaceae Plant Essential Oils and Their Constituents against Adults of German Cockroach (Blattella germanica)”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 60: 7194?7203.
Downloads
Publicado
Edição
Seção
Licença
Los autores que publican en esta revista están de acuerdo con los siguientes términos:
Los autores conservan los derechos de autor y conceden a la revista el derecho de la primera publicación.
Los autores pueden establecer por separado acuerdos adicionales para la distribución no exclusiva de la versión de la obra publicada en la revista (por ejemplo, situarlo en un repositorio institucional o publicarlo en un libro), con un reconocimiento de su publicación inicial en esta revista.
Se permite y se anima a los autores a difundir sus trabajos electrónicamente (por ejemplo, en repositorios institucionales o en su propio sitio web) antes y durante el proceso de envío, ya que puede dar lugar a intercambios productivos, así como a una citación más temprana y mayor de los trabajos publicados (Véase The Effect of Open Access) (en inglés).
