Primera Etapa en el desarrollo de un ELISA competitivo para la determinación de la proteína FABP-I aplicado a pacientes celíacos
Resumen
La proteína intestinal de unión a ácidos grasos (FABP2 o I-FABP), ha sido propuesta como un marcador temprano y específico de daño de la mucosa del intestino delgado en la enfermedad celíaca (EC). Las concentraciones circulantes elevadas de I-FABP se
asocian con grados crecientes de atrofia de las vellosidades intestinales y con la pérdida de la integridad de la barrera epitelial intestinal. Por lo tanto, esta proteína se podría utilizar como una herramienta más en el diagnóstico y seguimiento de esta patología.
El objetivo del presente trabajo fue desarrollar un enzimo-inmuno ensayo (ELISA) competitivo, para lograr una detección altamente sensible de I-FABP, y cuantificar esta proteína en muestras de suero de pacientes con EC. Para ello, se sensibilizó una placa de
ELISA con la proteína pura, y luego se aplicó una mezcla de anticuerpo específico anti IFABP y competidor (proteína recombinante). Con el agregado de un anticuerpo 2rio y el sustrato correspondiente de la enzima del conjugado, se pudo revelar la reacción. Se
realizó una curva de calibración con 6 concentraciones de I-FABP, en un rango de 4,12 a 140 ng/ml.
Mediante ensayos de inhibición, se pudo corroborar cómo concentraciones crecientes de la proteína I-FABP purificada, redujeron la unión del anticuerpo anti I-FABP a la I-FABP adsorbida a la placa, dando como resultado menor señal de absorbancia, a
Bitácora digital / Facultad de Ciencias Químicas (UNC) І2 mayores concentraciones de I-FABP y evidenciando así la competencia del anticuerpo primario específico por los sitios de unión al antígeno entre ambas proteínas: la I-FABP pegada a la placa y la I-FABP pura en solución.
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