Primera Etapa en el desarrollo de un ELISA competitivo para la determinación de la proteína FABP-I aplicado a pacientes celíacos
Abstract
La proteína intestinal de unión a ácidos grasos (FABP2 o I-FABP), ha sido propuesta como un marcador temprano y específico de daño de la mucosa del intestino delgado en la enfermedad celíaca (EC). Las concentraciones circulantes elevadas de I-FABP se
asocian con grados crecientes de atrofia de las vellosidades intestinales y con la pérdida de la integridad de la barrera epitelial intestinal. Por lo tanto, esta proteína se podría utilizar como una herramienta más en el diagnóstico y seguimiento de esta patología.
El objetivo del presente trabajo fue desarrollar un enzimo-inmuno ensayo (ELISA) competitivo, para lograr una detección altamente sensible de I-FABP, y cuantificar esta proteína en muestras de suero de pacientes con EC. Para ello, se sensibilizó una placa de
ELISA con la proteína pura, y luego se aplicó una mezcla de anticuerpo específico anti IFABP y competidor (proteína recombinante). Con el agregado de un anticuerpo 2rio y el sustrato correspondiente de la enzima del conjugado, se pudo revelar la reacción. Se
realizó una curva de calibración con 6 concentraciones de I-FABP, en un rango de 4,12 a 140 ng/ml.
Mediante ensayos de inhibición, se pudo corroborar cómo concentraciones crecientes de la proteína I-FABP purificada, redujeron la unión del anticuerpo anti I-FABP a la I-FABP adsorbida a la placa, dando como resultado menor señal de absorbancia, a
Bitácora digital / Facultad de Ciencias Químicas (UNC) І2 mayores concentraciones de I-FABP y evidenciando así la competencia del anticuerpo primario específico por los sitios de unión al antígeno entre ambas proteínas: la I-FABP pegada a la placa y la I-FABP pura en solución.
References
1. Wells JM y col. Homeostasis of the gut barrier and potential biomarkers. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2017; 312:G171–G193.
2. Wang L y col. Methods to determine intestinal permeability and bacterial translocation during liver disease. J Immunol Methods 2015; 421:44–53.
3. Rodríguez-Colman MJ y col. Interplay between metabolic identities in the intestinal crypt supports stem cell function. Nature 2017; 543(7645):424-427.
4. Bischoff SC y col. Intestinal permeability – a new target for disease prevention and therapy. BMC Gastroenterol 2014; 14:189.
5. Bitácora digital / Facultad de Ciencias Químicas (UNC) І12 5. Jandhyala SM y col. Role of the normal gut microbiota. World J Gastroenterol 2015; 21(29): 8787-8803.
6. Rooks MG y col. Gut microbiota, metabolites and host immunity. Nat Rev Immunol 2016; 16(6):341-52.
7. Yap YA y col. An insight into the intestinal web of mucosal immunity, microbiota, and diet in inflammation. Front Immunol 2018; 9:2617.
8. Ryu Okumura y col. Roles of intestinal epithelial cells in the maintenance of gut homeostasis. Exp Mol Med 2017; 49: e338.
9. Linsalata M y col. Noninvasive biomarkers of gut barrier function identify two subtypes of patients suffering from diarrhoea predominant-IBS: a case-control study. BMC Gastroenterology 2018; 18:167.
10. Samant H y col. Fecal calprotectin and its correlation with inflammatory markers and endoscopy in patients from India with inflammatory bowel disease. Indian J Gastroenterol 2015; 34(6):431-5.
11. Bjarnason I y col. Comparison of four markers of intestinal permeability in control subjects and patients with coeliac disease. Scand J Gastroenterol 1994; 29 (7): 630– 639.
12. Cox MA y col. Measurement of small intestinal permeability markers, lactulose, and mannitol in serum: results in celiac disease. Dig Dis Sci 1999; 44 (2):402–406.
13. Adriaanse MPM y col. Serum I-I-FABP as marker for enterocyte damage in coeliac disease and its relation to villous atrophy and circulating autoantibodies. Aliment Pharmacol Ther 2013; 37: 482–490.
14. Wu C y col. Intestinal fatty acid-binding protein as a biomarker for the diagnosis of strangulated intestinal obstruction: A meta-analysis. Open Med (Wars). 2021;16(1):264-273.
15. Gajda y col. Storch. Enterocyte Fatty Acid Binding Proteins (I-FABPs): Different Functions of Liver- and Intestinal- I-FABPs in the Intestine. Prost Leuk Essent Fatty Acids 2015; 93:9–16.
16. Bottasso Arias NM y col. Expression Pattern of Fatty Acid Binding Proteins in Celiac Disease Enteropathy. Mediators Inflamm 2015; 738563.
17. Vreugdenhil AC y col. Additional value of serum I-I-FABP levels for evaluating celiac disease activity in children. Scand J Gastroenterol 2011; 46(12):1435-41.
18. Carroccio A y col. Non-Celiac Wheat Sensitivity Diagnosed by Double-Blind Placebo- Controlled Challenge: Exploring a New Clinical Entity. Am J Gastroenterol 2012; 107:1898–1906.
19. Uhde M y col. Intestinal cell damage and systemic immune activation in individuals reporting sensitivity to wheat in the absence of coeliac disease. Gut 2016; 65:1930– 1937.
20. Sarikaya M y col. Intestinal fatty acid binding protein (I-I-FABP) as a promising test for Crohn's disease: a preliminary study. Clin Lab 2015; 61(1-2):87-91.
21. Roitt I, Brostoff J, Male D. Inmunología. Quinta Edición, Editorial Harcourt (2000).
22. Funaoka H y col. Development of a High-specificity Sandwich ELISA System for the Quantification of Human Intestinal Fatty Acid-Binding Protein (I-FABP) Concentrations. Immunol Invest 2011; 40:223–242.
23. Wodzig KW y col. One-step enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for plasma fatty acid-binding protein. Ann Clin Biochem 1997; 34:263-8.
24. Funaoka H y col. Intestinal fatty acid-binding protein (I-FABP) as a new biomarker for intestinal diseases. Rinsho Byori. 2010; 58(2):162-8. Bitácora digital / Facultad de Ciencias Químicas (UNC) І13
25. Messina, GA. Desarrollo de un enzimoinmunoensayo competitivo aplicado al control de alimentos para celíacos. Tesis de Maestría en Inmunología. Facultad de Química Bioquímica y Farmacia. Universidad Nacional de San Luis. 2019.
26. Córsico B y col. The helical domain of intestinal fatty acid binding protein is critical for collisional transfer of fatty acids to phospholipid membranes Proc Natl Acad Sci U S A 1998; 95(21):12174-8.
27. Richieri y col. Equilibrium constants for the binding of fatty acids with fatty acidbinding proteins from adipocyte, intestine, heart, and liver measured with the fluorescent probe ADIFAB, J Biol Chem 1994 ;269(39):23918-30.
28. Chamley LW y col. Conformationally altered beta 2-glycoprotein I is the antigen for anti-cardiolipin autoantibodies. Clin Exp Immunol 1999; 115(3):571-6.
29. Sacchettini JC y col. Crystal structure of rat intestinal fatty-acid-binding protein. Refinement and analysis of the Escherichia coli-derived protein with bound palmitate. J Mol Biol 1989; 208:327-39.
30. Hochegger R y col. Comparison of R5 and G12 Antibody-Based ELISA Used for the Determination of the Gluten Content in Official Food Samples. Foods 2015;4(4):654- 664.
31. Satoshi K y col. Establishment and Characterization of Monoclonal and Polyclonal Antibodies Against Human Intestinal Fatty Acid‐Binding Protein (I‐FABP) using Synthetic Regional Peptides and Recombinant I‐FABP. J Immunoassay & Immunochem 2008; 29: 19–41.
32. O'Regan TM y col. Development of a disposable immunosensor for the detection of human heart fatty-acid binding protein in human whole blood using screen-printed carbon electrodes. Talanta. 2002;57(3):501-10.
33. Bodelier AG y col. Plasma intestinal fatty acid-binding protein fails to predict endoscopic disease activity in inflammatory bowel disease patients. Eur J Gastroenterol Hepatol 2016; 28:807-13.
34. Singh A y col. Non-immunological biomarkers for assessment of villous abnormalities in patients with celiac disease. J Gastroenterol Hepatol. 2020;35(3):438-445.
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