Desarrollo de una técnica de detección de SARS-CoV-2 basada en inmunofluorescencia en muestras respiratorias de pacientes con COVID-19
Palabras clave:
SARSCoV-2/Covid-19, Inmunofluorescencia directa, epidemiologia, salud pública, ArgentinaResumen
Resumen:El SARS-CoV-2 es causante de COVID-19, un nuevo virus respiratorio de Wuhan, China, desde diciembre de 2019 y devino en la pandemia actual. La circulación e infección viral se volverían endémicas, por lo que la Inmunofluorescencia (IF) directa sería una metodología diagnóstica económica para la vigilancia centinela sostenida. Se propuso desarrollar una IF para SARS-CoV-2 en improntas con muestras respiratorias de pacientes enfrentadas con anticuerpos del suero de pacientes convalecientes como reactivo intermediario para el posterior marcaje con conjugado con fluorocromo.
Con aprobaciones del Comités de Ética, se obtuvieron hisopados nasofaríngeos y sueros de pacientes con COVID-19 confirmado por PCR. Las improntas se elaboraron siguiendo el método estándar en cabina de bioseguridad biológica. Las condiciones para la realización de la técnica de IF fueron: 1-Se ensayó con sueros problemas titulados por CovidAR, CMIA Arquitect-ABBOTT y Neutralización. 2-IgG anti-FC de IgG humana obtenidas en ratón y cabra conjugada con fluoresceína. 3-Bloqueo con albúmina y tween 20 en diferentes etapas de la técnica.
Los resultados obtenidos hasta ahora indican que la mejor combinación de condiciones implica el uso de bloqueo con albúmina al 1% + tween 20 al 0,05% sobre la impronta durante 20 minutos y una capa del suero humano con título de anticuerpos específicos de 1/80 NT. Además, funcionó mejor el conjugado de cabra. Permanece a la espera la validación y estandarización con anticuerpos monoclonales. Se realizarán análisis descriptivos mediante tablas y gráficos, estableciendo frecuencias absolutas y relativas (%). Se aplicarán análisis Chi cuadrado estimando sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivos y negativos. Se harán ensayos de validación interespecíficos e intraespecíficos y análisis estadísticos de IFD con respecto a biología molecular. Se utilizará el soft R-Medic y en todos los casos el nivel de significación será del 5%. Si bien la IF posee menor sensibilidad que los métodos moleculares, ofrece practicidad en la tarea inicial de tamizaje.
La relevancia del trabajo radica en poder implementar a futuro, una vez estandarizada y validada la técnica, la detección de SARS-Cov-2 como diagnóstico diferencial por IF, para distinguirlo entre los otros agentes virales del panel respiratorio, aportando al diagnóstico en la práctica clínica y a la vigilancia epidemiológica en Salud Pública.
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