Resultados de la implementación del Tubo de Screening Linfocitario (LST Oneflow) por citometría de flujo en tres laboratorios de diagnóstico Oncohematológico de Argentina

Resumen

Abstract

Immunophenotyping protocols generally include ?8-color tubes, combining multiple antibodies allowing precise characterization of normal and neoplastic leukocyte populations. The EuroFlow group has designated and evaluated an 8 color, 12 marker combination of antibodies for the detection of normal and aberrant populations of mature B, T and NK cells in peripheral blood (PB), bone marrow, and other tissues. The Lymphoid Screening tube (LST) in a dried single-test tube format, has recently been developed (OneFlowTM LST, BD Bioscience). In this study, we evaluated the OneFlow LST tube on three Argentinian Laboratories (Cordoba, Buenos Aires and Misiones) and median fluorescence intensity (MIF) values for individual markers on defined lymphocyte subsets were recorded, using BD FACSCanto II flow cytometers and Infinicyt 1.7 software (Cytognos SL). We also calculated biological reference intervals for Lymphocyte Subpopulations of 43 adult healthy donors. The results demonstrated that MIF values were highly comparable for most of markers at different laboratories by following the standardized EuroFlow protocols, except for SmIg kappa and TCR?? that showed more heterogeneity. However, in an automated population separator (APS) plot, tool of the Infinicyt software, showed highly overlapping populations, indicating that variations seen for some individual markers did not significantly impact the identification of the corresponding cell populations via multidimensional analysis. All data files obtained were merged and biological reference values calculated as mean ± standard deviation (SD) and rank for CD19+ B cells, CD19+kappa+ B cells, CD19+lambda+B cells, kappa/lambda ratio, CD3+T cells, CD3+CD4+T cells, CD3+CD8+T cells, CD4/CD8 ratio, CD3+TCR??T cells and CD3-CD56+ NK cells. There was no significant difference between men and women and all lymphocytes subsets showed normal distribution except in TCR?? T cells.

In summary, this study shows that using 8 colours LST dried tube following Euroflow protocols in standarizated laboratories allows comparable MIF for individual markers on defined lymphocyte subsets like mature B, T and NK cells of peripheral blood. Moreover, there are scarce information in the literature about Lymphocytes subsets reference values, using OneFlow LST tube.

Finally, we highlight how the LST dried format tube favors preanalytic work, reducing potential errors and avoiding the need to assess and monitor individual antibodies.

Key words: flow cytometry, Euroflow, lymphocyte population, OneFlow LST

Resumen

Los protocolos de inmunofenotipificación generalmente incluyen tubos de ? 8 colores, combinando múltiples anticuerpos que permiten una precisa caracterización de poblaciones de leucocitos normales y neoplásicos. El grupo EuroFlow ha designado y evaluado una combinación de 12 anticuerpos con 8 fluorocromos para la detección de poblaciones normales y aberrantes de células B, T y NK en Sangre Periférica (PB), Médula Ósea y otros tejidos. El tubo de Screening Linfocitario (LST) en formato seco, se ha desarrollado recientemente (OneFlowTM LST, BD Bioscience). En este estudio, evaluamos el tubo OneFlow LST en tres laboratorios argentinos (Córdoba, Buenos Aires y Misiones) y se analizaron los valores de Mediana de Intensidad de Fluorescencia (MIF) para marcadores individuales en subgrupos definidos de linfocitos, utilizando citómetros de flujo BD FACSCanto II y el software Infinicyt 1.7 (Cytognos SL).También calculamos los intervalos de referencia biológica para las subpoblaciones linfocitarias de 43 adultos sanos. Los resultados demostraron que los MIF eran altamente comparables para la mayoría de los marcadores en los diferentes laboratorios al seguir los protocolos estandarizados de EuroFlow, excepto SmIg kappa y TCR?? que mostraron mayor heterogeneidad. Sin embargo, en el gráfico separador automático de poblaciones (APS), herramienta del software Infinicyt, se mostraron poblaciones altamente superponibles, lo que indica que las variaciones observadas para algunos marcadores individuales no tuvieron un impacto significativo en la identificación de las poblaciones de células correspondientes mediante el análisis multidimensional.Todos los archivos de datos obtenidos se fusionaron y los valores de referencia biológicos se calcularon como Media ± Desviación Estándar (SD) y rango para células B CD19+, células B kappa+ CD19+, células B lambda+ CD19+, relación kappa/ lambda, células T CD3+, células T CD3+ CD4+, células CD3+ CD8+, relación CD4/CD8, células T CD3+ TCR??+ y células NK CD3-CD56+. No hubo diferencias significativas entre hombres y mujeres y todas las subpoblaciones de linfocitos mostraron una distribución normal, excepto las células TCR??.

En resumen, este estudio muestra que el uso del tubo seco LST siguiendo los protocolos de Euroflow en laboratorios estandarizados permite un MIF comparable para marcadores individuales en subpoblaciones definidas de linfocitos como células maduras B, T y NK en SP. Además, hay poca información en la literatura sobre los valores de referencia biológica de las subpoblaciones linfocitarias, utilizando el tubo OneFlow LST.

Finalmente, destacamos cómo el tubo LST en formato seco disminuye los errores de la etapa preanalítica, reduciendo errores potenciales y evitando la necesidad de evaluar y titular anticuerpos individuales.