aPorteS al conocimiento morfológico y fiSiológico  
de la reProducción Por SemillaS de ZePhyrantheS  
tubiSPatha (amaryllidaceae)  
contributionS to the morPhological and PhySiological Knowledge of  
reProduction by SeedS of ZePhyrantheS tubiSPatha (amaryllidaceae)  
1
1
2
M. Cecilia Acosta * , M. Luciana Alcaraz , H. Fabio Causin  
1
Vilma T. Manfreda  
&
Summary  
Background and aims: Zephyranthes tubispatha is a South American species with  
ornamental and pharmacological potential. We aimed to study: 1) attributes of fruits,  
seeds, seed-seedling transition substages, normal and abnormal seedlings; 2)  
germination due to the effect of different storage periods, seeding times, and exposure  
to supra-optimal temperatures; and 3) plant vigor.  
M&M: Samples harvested between 2018 and 2022 (Buenos Aires, Argentina) were  
used. Fruits and seeds were characterized morphometrically and seminal reserves  
histochemically. Substages during the seed-seedling transition were defined, and  
normal and abnormal seedlings were morphologically described. The germination  
of seeds from different storage periods, seeding times, and thermal conditions was  
evaluated. Changes in seed viability, electrolyte loss, and plant vigor were studied.  
Results: In the seeds, lipids and proteins were detected as reserves. Normal and  
abnormal seedlings and the seed-seedling transition with five substages were  
described. Seeds of up to 10 months of storage, different seeding times and thermal  
conditions presented high germination percentages. High temperatures thermoinhibited  
germination, but did not affect subsequent plant survival.  
1
.
N ú c l e o d e E st u d i o s  
Vegetacionales y Agroecológicos  
de Azul (NUCEVA), Facultad de  
Agronomía, Universidad Nacional  
del Centro de la Provincia de  
Buenos Aires. Azul, Buenos Aires,  
Argentina  
2
. Instituto de Biodiversidad y  
Biología Experimental (IBBEA),  
CONICET-UBA, Departamento  
de Biodiversidad  
y Biología  
Experimental (DBBE), F.C.E.N.,  
Universidad de Buenos Aires.  
Ciudad Universitaria, C.A.B.A.,  
Argentina  
Conclusions: Storage for more than one year showed increased seed mortality and  
seedling anomalies. The seeding moment conditioned the germination response to the  
heat treatments, and thermoinhibition did not affect the vigor of the plants produced.  
*
cacosta@azul.faa.unicen.edu.ar  
Citar este artículo  
ACOSTA, M. C., M. L. ALCARAZ,  
H. F. CAUSIN & V. T. MANFREDA.  
Key wordS  
2
023. Aportes al conocimiento  
Germination, seeding, seedlings, substages, storage, thermoinhibition, vigor.  
morfológico fisiológico de  
la reproducción por semillas  
y
reSumen  
de Zephyranthes tubispatha  
Introducción y objetivos: Zephyranthes tubispatha es una especie sudamericana  
con potencial ornamental y farmacológico. Se planteó estudiar: 1) atributos de frutos,  
semillas, subestadios de transición semilla-plántula, plántulas normales y anormales;  
(
Amaryllidaceae). Bol. Soc. Argent.  
Bot. 58: 399-419.  
2) la germinación por efecto de diferentes periodos de almacenamiento, momentos de  
DOI: https://doi.  
org/10.31055/1851.2372.v58.  
n3.40185  
semillazón y exposición a temperaturas supraóptimas; y 3) el vigor de plantas.  
M&M: Se utilizaron muestras cosechadas entre 2018 y 2022 (Buenos Aires, Argentina).  
Se caracterizaron morfométricamente frutos y semillas, e histoquímicamente las  
reservas seminales. Se definieron subestadios durante la transición semilla-plántula,  
y describieron morfológicamente plántulas normales y anormales. Se evaluó la  
germinación de semillas prevenientes de diferentes periodos de almacenamientos,  
momentos de semillazón y condiciones térmicas. Se estudiaron cambios en la  
viabilidad de semillas, pérdida de electrolitos, y el vigor de plantas.  
Resultados: En las semillas se detectó como reserva lípidos y proteínas. Se  
describió plántulas normales y anormales, y la transición semilla-plántulas con cinco  
subestadíos. Semillas de hasta 10 meses de almacenamiento, diferentes momentos  
de semillazón y condiciones térmicas presentaron altos porcentajes de germinación.  
Las altas temperaturas termoinhibieron la germinación, pero no afectaron la posterior  
supervivencia de plantas.  
Conclusiones: El almacenamiento por más de un año evidenció aumento en la  
mortalidad de semillas y anomalías en plántulas. El momento de semillazón condicionó  
la respuesta germinativa a los tratamientos térmicos y la termoihibición no afectó el  
vigor de plantas producidas.  
Recibido: 15 Feb 2023  
Aceptado: 5 Jun 2023  
Publicado en línea: 30 Ago 2023  
Publicado impreso: 30 Sep 2023  
Editores: Agostina B. Sassone  
PalabraS clave  
Almacenamiento, germinación, plántulas, semillazón, subestadios, termoinhibición,  
vigor.  
&
Nicolás García Berguecio  
ISSN versión impresa 0373-580X  
ISSN versión on-line 1851-2372  
399  
Bol. Soc. Argent. Bot. 58 (3) 2023  
introducción  
En líneas generales las geófitas tienen capacidad  
de sobrevivir debajo de la superficie del suelo  
Zephyranthes tubispatha (L’Hér.) Herb. es una durante un período prolongado ya que poseen  
especie nativa (familia Amaryllidaceae), que se un sistema autónomo y altamente desarrollado  
circunscribe al subgénero Zephyranthes Herb., el donde almacenan agua y nutrientes. Este conjunto  
más diverso y complejo del género (García et al., de características han despertado el interés de  
2
019). Es herbácea, perenne, con hojas de láminas productores tanto para la industria de flores de corte,  
lineales, bulbosa y presenta una única flor por como para ampliar la oferta de plantas con flores  
escapo con tépalos de colores diversos (anaranjada, para macetas u ornamentales para jardines (Moreira  
amarilla, rosa o blanca) que da un único fruto et al., 2018; Fernández, 2020).  
(
(
cápsula) que contiene numerosas semillas En Argentina, la producción y comercialización  
Roitman & Hurrell, 2009). Se distribuye por el sur de plantas con flores (floricultura) se concentra  
de Estados Unidos y México, y en Sudamérica en principalmente en las zonas periurbanas de Buenos  
el centro y sur de Chile, Brasil austral, Paraguay, Aires (Morisigue et al., 2012; Aguilar-Avendaño,  
Uruguay y Argentina. Dentro de Argentina, se 2016; Noguera Serrano et al., 2017) y actualmente  
encuentra principalmente en las provincias de se está incursionando en la colecta, reproducción  
Corrientes, Santa Fe, Entre Ríos y Buenos Aires y producción de flores de los recursos genéticos  
(Arroyo, 1990; Roitman & Hurrell, 2009). En esta nativos ornamentales (Facciuto et al., 2019;  
última provincia se halla ampliamente distribuida Eynard et al., 2020). Dentro de las especies que  
tanto en los cordones serranos del centro como se comercializan, la familia Amaryllidaceae posee  
en áreas de llanura (Antón & Zuloaga, 2022). En importancia mundial en paisajismo contemporáneo  
particular en el centro y sudeste de la Provincia (Fernández, 2020). La producción de plantas  
de Buenos Aires se encuentra en el Sistema de con flores ha forjado demandas de cadenas  
Tandilia y en la Pampa Deprimida (Erize & Haene, productivas para desarrollar y vender material  
2
008; Sabatino et al., 2017; Vercelli, 2018), tanto de siembra como semillas, plántulas y esquejes  
en ambientes rurales como urbanos y periurbanos (Aguilar-Avendaño, 2016; Noguera Serrano et  
M. C. Acosta, obs. pers.). En líneas generales al., 2017). Promover la utilización de la flora  
(
los estadios vegetativos se dan durante el otoño- nativa potencia los recursos genéticos vegetales  
invierno y la floración durante la primavera y de la Argentina, su aprovechamiento racional y  
el verano (Streher, 2016; Fernández, 2020). En sostenible, junto con la necesidad de conservarlos y  
el Sistema de Tandilia se observan las primeras preservarlos (Fernández, 2020). Puntualmente, para  
floraciones a mediados de noviembre luego de Z. tubispatha se ha profundizado el conocimiento  
abundantes lluvias, y las últimas a fines de marzo.  
en cuanto a formas y técnicas de reproducción por  
Esta especie presenta, por un lado, interés cultivo in vitro y por micropropagación de bulbos  
farmacológico ya que sus bulbos contienen tazetina (Rossello et al., 2006; Fernández et al., 2011;  
al igual que otras especies vegetales de la familia Fernández, 2020). No obstante, la reproducción por  
Amaryllidaceae (Vergara Zurita, 2020). La tazetina semillas es generalmente más simple y económica,  
es un alcaloide considerado un hipotensor débil permite la posibilidad de conservar y seleccionar  
que posee además actividad antiinflamatoria, por variabilidad dentro de las poblaciones. Si  
antitumoral, antimalárico y antibacterial (Cabezas bien las semillas de esta especie se comercializan  
et al., 2007) . Cavallaro (2015) también evidenció la en diferentes partes del mundo, es escasa la  
presencia de tres alcaloides (hippeastidina, licorina información disponible respecto a la conservación,  
y 3-O-demetilhippeastidina) importantes en la longevidad y efectividad de la reproducción por  
paliación del Alzheimer. Por otro lado, ha cobrado este medio, como así también la referente a las  
interés como potencial ornamental debido a sus particularidades de la transición semilla-plántula  
atractivas flores coloridas, su gran adaptabilidad a y el efecto de factores ambientales y de las  
la zona semiárida y por los servicios ecosistémicos condiciones de almacenamiento sobre el vigor.  
que brinda (Maza et al., 2004; Rossello et al., Este último concepto hace referencia al desempeño  
2
006; Sanhueza et al., 2014; Streher, 2016; Afroz de las semillas para producir plántulas normales  
et al., 2018; Moreira et al., 2018; Fernández, 2020). en diversas condiciones ambientales de cultivo  
400  
M. C. Acosta et al. - Reproducción por semillas de Zephyranthes tubispatha  
(Besnier Romero, 1989; Peretti, 1994; Geneve,  
En relación a la longevidad de las semillas de esta  
2
005; ISTA, 2006), por lo que es considerado especie, los estudios son escasos y con resultados  
como un atributo de la calidad de las semillas no siempre coincidentes. Por ejemplo, Maza et al.  
importante al momento de utilizarlas para su (2004) registraron que las semillas de esta especie  
siembra en condiciones ambientales no favorables. mantiene un 60% de éxito en la germinación luego  
Los procesos que median desde la germinación hasta de un año de conservación a 23 °C, mientras que  
el establecimiento de plántulas son claves dentro Afroz et al. (2018) señalan que pierden rápidamente  
del ciclo de vida de las plantas (Benech-Arnold & la viabilidad. La confirmación de esta información  
Sanchez, 2004; Marcos-Filho, 2015) y requieren de resulta importante para prever disponibilidad y  
información básica, tales como las características de ofertas de semillas a lo largo de un año. Respecto  
las semillas, los requerimientos de germinación y la a las plántulas, si bien la morfología no ha sido  
descripción de una plántula normal para la especie. particularmente detallada en esta especie, se cuenta  
En cuanto a las características de las semillas con descripciones morfológicas preliminares  
de Z. tubispatha se han descrito comúnmente (Acosta et al., 2021) que permiten reconocer  
como negras, planas y deltoides (Roitman & y extrapolar macroscópicamente estructuras  
Hurrell, 2009). En cuanto a los requerimientos para similares a las descritas por Tillich (2007) en  
la germinación, Z. tubispatha alcanza máximos monocotiledóneas. Por su parte Goyenetche et al.  
porcentajes entre los 15 y 25 °C (Maza et al., (2022) profundizó en la caracterización morfológica  
2004; Manfreda et al., 2017; Acosta et al., 2022), y anatómica de Z. bifida (Herb.) Nic. García &  
decayendo marcadamente por encima de estas Meerow (taxonómicamente cercana a Z. tubispatha)  
temperaturas. Las semillas cuando son incubadas y propuso estados de desarrollo de la transición  
a alta temperatura (supraóptimas) no germinan, sin semilla-plántula. Respecto a esto último, el sistema  
embargo cuando son posteriormente transferidas de escalas universales BBHC (Meier, 2018) propone  
a 20 °C, recobran plenamente la germinación, estados de desarrollo fenológicos para especies  
sugiriendo que el fenómeno subyacente es el de monocotiledóneas en general, que ha sido utilizado  
termoinhibición (Manfreda et al., 2019; Acosta et para generar escalas de algunas Amaryllidaceae de  
al., 2022 y referencias allí citadas). Cabe señalar que importancia económica como hortalizas (bulbosas  
si bien la exposición a alta temperatura no modifica del género Allium: puerro, ajo, cebolla y chalote),  
significativamente la mortalidad seminal, puede pero que aún no han sido adecuadas para otras  
alterar considerablemente tanto el tiempo de inicio especies de esta familia como Z. tubispatha.  
como la velocidad de la germinación a temperaturas  
La importancia de contar con información  
óptimas (Manfreda et al., 2019; Acosta et al., 2022). relevante que permita contribuir al manejo,  
Si bien la presencia de termoinhibición se considera conservación y reproducción por semillas de Z.  
de valor adaptativo en especies que ajustan su tubispatha, requiere completarla y ampliarla.  
actividad a la época invernal, propio de los ambientes En este sentido se definieron los siguientes  
mediterráneos con veranos secos e inviernos objetivos: 1) describir los principales atributos  
húmedos (Huo & Bradford, 2015; Derakhshan et de frutos y semillas; 2) reconocer estructuras  
al., 2018), el registro de su presencia en el género que permiten discernir macroscópicamente  
Zephyranthes, y en particular en Z. tubispatha ha diferentes subestadios de desarrollo en la transición  
sido muy reciente y poco investigado. Considerando semilla-plántula y detectar las anormalidades  
que la producción de semillas en esta especie abarca más frecuentes; 3) evaluar el efecto de diferentes  
todo el período estival, pudiendo eventualmente períodos de almacenamiento de las semillas sobre el  
permanecer termoinhibidas por la presencia de altas comportamiento germinativo y el deterioro seminal;  
temperaturas en condiciones favorables para la 4) analizar el efecto del momento de producción de  
germinación (por ejemplo precipitaciones), resulta semillas (fines de primavera o mediados de verano)  
necesario indagar si el momento de semillazón y de diferentes periodos de exposición a altas  
(inicios o fines de verano, por ejemplo) condiciona temperaturas sobre la germinación; y 5) analizar  
a su vez la respuesta germinativa y el vigor de las en semillas producidas a mediados de verano el  
plantas producidas cuando se dan las condiciones efecto de diferentes períodos de exposición a altas  
térmicas similares al período otoñal.  
temperaturas sobre el vigor de las plantas obtenidas.  
401  
Bol. Soc. Argent. Bot. 58 (3) 2023  
materialeS y métodoS  
con agua, e incubadas en recipientes a baño maría,  
cubiertas con fundas plásticas negras y llevadas a  
Colección de semillas y condiciones generales de cámaras de cultivo a 20 °C o 33 °C, dependiendo  
germinación  
del tratamiento (ver más abajo).  
Frutos y semillas de Z. tubispatha fueron  
recolectados en las Sierras de Azul (S 37˚ 8.254ˈ O Evaluación de frutos, semillas, transición semilla-  
9˚ 46. 386ˈ) y en las Sierras Bayas (S 36˚ 56.369ˈ plántula, plántulas normales y anormales  
O 60˚ 09.315ˈ), ambas pertenecientes al Sistema La estimación del número de semillas por  
5
de Tandilia, ubicadas en el centro de la provincia fruto se realizó sobre 10 frutos maduros (aún  
de Buenos Aires (Argentina). Las recolecciones se cerrados al momento del trillado). Los mismos  
realizaron a fines de primavera durante diciembre fueron seleccionados al azar de una muestra de  
y a mediados de verano durante enero, entre 2018- aproximadamente 100 frutos cosechados de la  
2
022. Las plantas en flor, de ambas localidades, población de las Sierras de Azul en diciembre  
se hacen visibles luego de lluvias intensas con de 2021. Las semillas se describieron a simple  
alta densidad y concentradas en áreas reducidas, vista según aspectos distinguibles de su forma,  
por lo que la recolección de frutos se realizó al textura y coloración, y finalmente se tomaron  
azar y de forma manual dentro de cada sector, registros fotográficos tanto de los frutos como  
asegurando que los frutos estuvieran en madurez de las semillas para realizar mediciones de largo  
fisiológica (próximos a la dehiscencia) y que fueran y ancho utilizando el procesador de imágenes  
de similar coloración y tamaño. La recolección público Image J versión 1.53e (Schneider et  
se realizó en sobres de papel madera indicando al., 2012). Se pesaron semillas en una balanza  
fecha y lugar de procedencia. En el laboratorio, analítica de precisión (Sartorius M-Power AZ-  
los frutos se trillaron a mano, descartando aquellos 214) para estimar el peso de 1000, siguiendo el  
que estuvieran dañados, y las semillas se colocaron criterio general del ISTA (2003). Se realizó la  
sobre papel madera para su secado a temperatura determinación de las reservas seminales mediante  
ambiente (aproximadamente durante 20 días). pruebas histoquímicas tomando cinco semillas  
Una vez secas, se almacenaron en igual condición al azar de cada población (Sierras de Azul y de  
por diferentes períodos (meses), dependiendo del Sierras Bayas). Para ello, semillas categorizadas  
tratamiento. Dado que los frutos se recolectaron exomorfológicamente como normales se hidrataron  
en ambientes serranos cercanos y que las pruebas durante 2 horas para facilitar su manipulación y se  
preliminares de germinación no evidenciaron realizaron cortes delgados a mano alzada de la  
respuestas diferenciales de los diferentes sitios región del endosperma. Las muestras se tiñeron  
(
datos no mostrados), las semillas se utilizaron con soluciones acuosas al 0,01% de azul de nilo  
de manera indistinta para todos los ensayos. Los (7-dietilamino-3,4-benzofenoxazina-2-ona), como  
ejemplares de Z. tubispatha fueron identificados por sonda fluorescente para lípidos (Fulcher, 1982) y  
el personal responsable del Herbario FAA (Thiers, amido black al 0,5% en ácido acético al 7% o una  
permanentemente actualizado) y depositados según solución comercial de lugol, para la determinación  
los registros: ARGENTINA. Prov. Buenos Aires: de proteínas y almidón, respectivamente (Harris &  
Pdo. Azul, Azul, S 37˚ 8.254ˈ O 59˚ 46. 386ˈ, Oparka, 1994). Los preparados se observaron en un  
6
-XII-2018, Scaramuzzino et al. s.n. (FAA 8850). microscopio Axioskope 2 (Zeiss) provisto con un  
Pdo. Olavarría, Sierras Bayas, S 36˚ 56.369ˈ O 60˚ equipo de epifluorescencia HBO100.  
0
9.315ˈ, 20-XII-2018, Acosta & Scaramuzzino s.n.  
La descripción e identificación de estructuras, de  
(
FAA 9598).  
la transición semilla-plántula (Estadio 0 en la escala  
Todos los ensayos de germinación se realizaron general para monocotiledóneas BBCH, 2018) se  
en cajas de Petri con 50 semillas cada una, realizó utilizando las descripciones morfológicas  
sembradas sobre una capa de papel de filtro más preliminares realizadas en Z. tubispatha (Acosta  
cuatro de papel toalla y 5 ml de agua destilada, por et al., 2021), la terminología de estructuras  
cuadruplicado. Con el fin de evitar la desecación, descritas para monocotiledóneas (Tillich, 2007) y  
las cajas fueron colocadas en contenedores las empleadas para Z. bifida (Goyenetche et al.,  
plásticos negros sobre goma espuma embebida 2022). Se utilizaron semillas categorizadas como  
402  
M. C. Acosta et al. - Reproducción por semillas de Zephyranthes tubispatha  
normales, cosechadas en diciembre de 2020 y semillas no germinadas se clasificaron siguiendo  
2021, las mismas fueron conservadas a temperatura los criterios generales del ISTA (2006) en: firmes a  
ambienteyalmomentodesuusocontabancon22y10 la presión (F), vacías (V) o muertas (M). Con estos  
meses de almacenamiento, respectivamente. Ambos datos y el de semillas germinadas (G), se calculó el  
lotes de semillas fueron puestos a germinar a 20 °C porcentaje de la germinación acumulada en el tiempo  
con fotoperíodo de 12 h. Adicionalmente se agregó (%Gt), y los porcentajes de cada estado final seminal  
un tratamiento de oscuridad total para las semillas (%G, %F y %M), descontando del total las semillas  
de 10 meses de almacenamiento, para confirmar V. Las semillas se consideraron germinadas cuando  
estructuras fotosintéticas (comparativamente con se observó al menos 1 mm de longitud del embrión  
las de luz) y describir fenotípicamente el efecto de emergido (Fig. 1A).  
la ausencia de luz. Cada unidad experimental fue  
La evaluación del grado de deterioro de las  
en número y conducción, de igual manera que lo semillas almacenadas por diferentes periodos se  
ya descrito en condiciones generales. Durante la realizó mediante un análisis de pérdida de electrolitos  
imbibición se registró el peso fresco de semillas como indicador de daño en biomembranas (Pandey,  
cada 12 h hasta el inicio de germinación, utilizando 1988; Bajji et al., 2002; Ouyang et al., 2002). Se  
una balanza analítica. Luego desde el inicio de la utilizaron muestras de 100 mg de semillas de 4 y 18  
germinación se separaron diariamente las semillas meses de almacenamiento a temperatura ambiente,  
germinadas y fueron colocadas en recipientes que fueron recolectadas en diciembre de 2021 y  
individuales (previamente rotulados por día) sobre 2020, respectivamente. Se colocaron las semillas en  
sustrato de papel, agua y respetando la condición 15 ml de agua destilada y se dejaron a temperatura  
lumínica de germinación. A los 11 días de iniciada ambiente durante 3 h con agitación constante (50  
la germinación, se realizaron observaciones de la rev/min). Transcurrido este tiempo, se retiraron las  
morfología de las plántulas y se tomaron fotos. semillas y se registró la conductividad eléctrica de  
Finalmente se identificaron características visibles la solución con un conductímetro portátil AD230  
de plántulas normales y anormales por comparación (Adwa). El porcentaje de la proporción de pérdida  
de presencia/ausencia, coloración y tamaño de de electrolitos se estimó como el cociente entre la  
estructuras. Estas últimas se midieron utilizando el medición realizada a las 3 h, sobre la conductividad  
procesador de imágenes público Image J versión obtenida luego de hervir cada muestra a 85 °C y  
1.53e (Schneider et al., 2012).  
luego multiplicada por 100.  
Por otro lado, también se analizó el efecto del  
Efecto del período de almacenamiento de semillas período de almacenamiento sobre la viabilidad  
sobre el comportamiento germinativo y el deterioro de las semillas mediante la prueba de tinción con  
seminal  
trifenil tetrazolio. Para ello, se utilizaron semillas de  
La evaluación del comportamiento germinativo se 6, 10 y 18 meses de almacenamiento a temperatura  
realizó con semillas recolectadas durante los meses ambiente (15 por condición, las primeras cosechadas  
de diciembre del 2018 al 2021, las que permanecieron en diciembre de 2021 y las dos últimas en 2020).  
a temperatura ambiente por diferentes periodos hasta Las semillas se hidrataron por 12 h, y luego se  
su uso: 10, 12, 22, 34 y 46 meses de almacenamiento. extrajeron los embriones, se colocaron en tubos  
Se utilizó para el tratamiento control semillas plásticos con 1,5 ml de una solución de cloruro de  
cosechadas en 2021 y secadas al aire durante 20 trifenil tetrazolio al 0,1%. Tras 2 h de incubación en  
días (0 meses de almacenamiento). Las unidades baño maría, a 33 °C y en oscuridad, los embriones se  
experimentales fueron colocadas en condiciones enjuagaron y se mantuvieron en agua destilada hasta  
de germinación a 20 °C y en oscuridad, siguiendo su observación con microscopio estereoscópico,  
el procedimiento general ya descrito. Se tomaron registrándose fotográficamente los resultados. Se  
registros diarios hasta el inicio de la germinación empleó la terminología utilizada por Goyenetche et  
(
10% de semillas germinadas), intensificándose al. (2022) en Z. bifida para indicar las 3 estructuras  
los mismos desde ese momento cada 10-12 horas del embrión de Z. tubispatha que resultaron o  
aproximadamente. Los seguimientos se dieron por no coloreadas luego de la prueba: hiperfilo del  
finalizados cuando no se registró ningún evento cotiledón, anillo del hipofilo del cotiledón e hipofilo  
de germinación por al menos 120 h seguidas. Las del cotiledón (Fig. 1B).  
403  
Bol. Soc. Argent. Bot. 58 (3) 2023  
Fig. 1. Semilla y embrión aislado de Zephyranthes tubispatha. A. Semilla en inicio de germinación. B.  
Embrión aislado de semilla hidratada. Abreviaturas= a: anillo del hipofilo cotiledonar; c: cotiledón; hipe(c):  
hiperfilo cotiledonar; hipo(c): hipofilo cotiledonar. Escalas= 1 mm.  
Efecto de la alta temperatura sobre la germinación Efecto de diferentes períodos de exposición de  
de semillas producidas a mediados de verano y fin semillas a altas temperaturas, sobre el vigor de las  
de primavera.  
plantas obtenidas.  
Se utilizaron semillas provenientes de dos  
Se utilizaron plántulas provenientes de las  
momentos de semillazón: a mediados de verano semillas germinadas de los tratamientos 0dHT, 9dHT  
durante el mes de enero y otras a fines de primavera y 30dHT del lote E21, las que fueron trasplantadas  
durante el mes de diciembre de 2021 (E21 y D21, en macetas para su posterior seguimiento. Se  
respectivamente). Las semillas se colocaron en utilizaron macetas de 4 L de capacidad conteniendo  
condiciones de germinación, tal como ya fue 3/4 de tierra abonada, 1/8 de arena y 1/8 de perlita,  
descrito en la sección de condiciones generales, regadas con agua de red hasta capacidad de campo.  
y se incubaron a 33 °C (HT) durante 9 o 30 días Se trasplantaron entre 25 y 40 plántulas por  
(
tratamientos 9dHT y 30dHT, respectivamente), repetición (cuatro) y tratamiento (dependientes del  
en oscuridad. Transcurridos estos tiempos de éxito germinativo). Se mantuvieron en cámaras  
incubación, se traspasaron a 20 °C y se evaluó la de cultivo por 5 semanas a 20 °C y fotoperiodo  
germinación tal como se describió para los otros de 12 h con riego permanente. Luego de este  
ensayos. Se utilizó como control la germinación período se calculó el porcentaje de supervivencia  
de semillas a 20 °C sin exposición previa a HT (%S) como la cantidad de plantas cosechadas  
(
tratamiento 0dHT). Todos los tratamientos se respecto a las totales trasplantadas, multiplicadas  
realizaron por cuadruplicado. por 100. Al momento de la cosecha las plantas  
404  
M. C. Acosta et al. - Reproducción por semillas de Zephyranthes tubispatha  
fueron individualmente fotografiadas y, debido a la T se realizó una prueba no paramétrica de Kruskal  
1
0
heterogeneidad de tamaños dentro de cada unidad Wallis (α ≤ 0,05), dado que los mismos carecieron  
experimental, las plantas fueron categorizadas por de normalidad y/o homecedasticidad (Sokal &  
tamaño (altura total) en chicas, medianas y grandes. Rohlf, 1986).  
Para cada tratamiento se cuantificó el número de  
El análisis del efecto de diferentes períodos de  
plantas de cada categoría y se calculó su frecuencia exposición de semillas a HT sobre el vigor de las  
relativa (%Fr). Como variables del crecimiento se plantas producidas, por un lado se llevó adelante  
registraron el largo total (Lt) en cm de la parte área con un ANOVA de dos factores: tratamientos  
y los pesos secos de la fracción aérea (PSa) y de la (0dHT, 9dHT y 30dHT) y categoría de tamaño  
fracción subterránea (PSs). El Lt de cada planta se (chicas, medianas y grandes) para las variables %Fr,  
obtuvo utilizando el procesador de imágenes Image Lt, PSa y PSs, una vez comprobada la normalidad  
J versión 1.53e (Schneider et al., 2012). sobre cada y/o homecedasticidad y transformación de ser  
registro fotográfico. Al momento de la cosecha cada necesario. Por otro lado, se realizó un ANOVA  
planta fue fraccionada en parte aérea y subterránea, de un solo factor (tratamiento) para las variables  
y las fracciones fueron llevadas a estufa (72 h, 70 %FrH1, %FrH2, %FrH3 y % FrH4. Los contrastes  
°
C) para la determinación del peso seco, registrado se realizaron con la prueba de Tukey (α ≤ 0,05).  
con balanza analítica. De aquí se obtuvo el PSa Todos los procedimientos estadísticos descritos  
mg) y PSs (mg) promedio por planta, dividiendo en este apartado se realizaron con el programa  
(
el peso seco del conjunto de plantas dentro de cada InfoStat versión 2018 (Di Rienzo et al., 2018).  
categoría de tamaño por la cantidad de plantas de  
esa categoría. Complementariamente para evaluar  
el efecto de los tratamientos sobre el desarrollo reSultadoS  
(independientemente de las categorías de tamaño),  
se contabilizó en cada planta fotografiada, el Frutos, semillas, transición semilla-plántula,  
número de hojas visibles y se calculó la frecuencia plántulas normales y anormales  
relativa (%FrH) de plantas con una, dos, tres o  
Las cápsulas aún cerradas colectadas en su  
cuatro hojas (%FrH , %FrH , %FrH , %FrH , ambiente natural, presentaron dimensiones de 0,9  
1
2
3
4
respectivamente).  
cm (± 0,2) de largo y 0,7 (± 0,1) cm de diámetro  
Fig. 2A). La cantidad de semillas promedio  
por fruto fue de 90 (± 9,6). Dentro de la escasa  
(
Análisis de datos  
Tanto los datos morfométricos de semillas y variabilidad de formas encontradas, en su mayoría  
frutos, como las longitudes de algunas estructuras correspondieron a semillas planas y deltoides, con  
de las plántulas se analizaron de manera tegumento externo de textura lisa y color negro  
descriptiva comparando medias y desvíos. El brillante. Las pocas anormalidades detectadas  
comportamiento germinativo sobre cada unidad consistieron en alteraciones en el grosor, sea  
experimental inicialmente se evaluó por medio de por su irregularidad o por su escaso espesor, en  
un ajuste no lineal de los porcentajes acumulados este último caso acompañada por una superficie  
de germinación (%Gt) en función del tiempo (t) con reducida (semillas vanas) (Fig. 2B). Respecto a  
la siguiente función: %Gt= A*(1- 1/(1+(t/B)^k)) las dimensiones, las semillas categorizadas como  
(Geshnizjani et al., 2018; Manfreda et al., 2020). De normales presentaron valores entre 0,5 (± 0,05) y  
la misma se obtuvieron los siguientes parámetros: 0,4 (± 0,06) cm de largo y ancho, respectivamente.  
Porcentaje Máximo de Germinación (parámetro El peso de 1000 semillas fue de 1,38 g (± 0,03).  
A); Tiempo Medio de Germinación (parámetro Las pruebas histoquímicas en semillas hidratadas  
B) y el valor adimensional de la Uniformidad evidenciaron que el endosperma de esta especie  
en la Germinación (parámetro k). Además con contiene abundantes lípidos y proteínas (Fig. 3),  
esta ecuación se estimó el tiempo de inicio de mientras que no se detectó la presencia de almidón  
germinación (T ). Para analizar tanto el efecto (datos no mostrados).  
1
0
del período de almacenamiento de semillas como  
En la descripción morfológica y macroscópica  
el periodo de exposición a HT de semillas E21 y de los subestadios de la transición semilla-  
D21 (y su interacción) sobre cada parámetro y el plántula proveniente de semillas de 10 meses de  
405  
Bol. Soc. Argent. Bot. 58 (3) 2023  
Fig. 2. Cápsulas y semillas de Z. tubispatha. A. Cápsulas cerradas, abiertas y con semillas a la vista. B.  
Detalle de variabilidad en tamaño y forma de semillas. Círculo blanco indica semilla irregular, círculo verde  
semilla vana. Escalas= 5 mm.  
almacenamiento y germinada bajo luz, se logró fresco inicial por hidratación (de 0,04 a 0,16  
registrar un primer subestadio que comprendió g ± 0,03) (Fig. 4A). Un segundo subestadio se  
desde la siembra (imbibición) hasta el momento correspondió con la germinación, en el que se  
previo de la germinación. En este primer subestadio observó la emergencia (crecimiento) del hipofilo  
las semillas incrementaron cuatro veces su peso del cotiledón de coloración inicial blanquecina y  
406  
M. C. Acosta et al. - Reproducción por semillas de Zephyranthes tubispatha  
Fig. 3. Prueba histoquímica en endosperma de Z. tubispatha. A. Reacción positiva para lípidos con azul de  
nilo. B. Reacción positiva para proteínas con amido black. Abreviatura= n: núcleo. Escalas= 20 μm.  
de aproximadamente 2 mm de longitud (Fig. 4B). crecimiento del eje embrionario (Fig. 4E). Un quinto  
Cabe destacar que el eje embrionario, que se ubica subestadio se estableció a partir de la visualización  
en el extremo inferior de dicha estructura, es de un del primer eófilo (hoja verdadera), el cual emerge  
tamaño muy reducido y en este subestadío aún no ha a través del anillo del hipofilo del cotiledón. La  
iniciado su crecimiento. El hiperfilo del cotiledón zona proximal del hiperfilo del cotiledón adquirió  
en este subestadio es blanquecino (Fig. 4C) y aún coloración verde y se extendió por fuera de  
permanece en el interior de la semilla. Este segundo la semilla alcanzando una longitud máxima de  
subestadio fue el empleado para determinar la aproximadamente 2 mm, mientras que el hipofilo  
germinación, y en estas condiciones, se alcanzó se engrosó paulatinamente, tomando primero una  
a las 40 h aproximadamente desde la siembra coloración rojiza y finalmente verde, sin modificar  
(
ver comportamiento germinativo en la próxima su longitud (Fig. 4F). A medida que progresó esta  
sección). En un tercer subestadio se observó un última etapa se observó un continuo crecimiento  
marcado crecimiento del hipofilo del cotiledón, el del eófilo y de la raíz primaria, mientras que la zona  
cual alcanzó una longitud final promedio de 4 mm distal del hiperfilo (haustorio) permaneció en el  
(Fig. 4D) y adquirió paulatinamente una coloración interior de la semilla.  
verde pálida. El cuarto subestadio se caracterizó Más avanzado en el subestadio 5, el haustorio  
por el desarrollo de estructuras propias del sistema mostró claros síntomas de inicio de senescencia y  
radical (elongación de la radícula y la aparición el endosperma en estas instancias fue muy escaso.  
de rizoides del cuello), como consecuencia del Tanto la parte emergida del eófilo como la raíz  
407  
Bol. Soc. Argent. Bot. 58 (3) 2023  
Fig. 4. Subestadios en la transición semilla-plántula de Z. tubispatha. A. Semilla completamente hidratada.  
B. Semilla germinada. C. Embrión aislado de semilla germinada. D. Hipofilo del cotiledón totalmente  
expandido. E. Aparición de estructuras del sistema radical, con detalle en extremo superior derecho. F.  
Eófilo emergido con detalle en extremo inferior izquierdo. G. Plántula completa y normal a 11 días desde  
la siembra, y cubierta seminal (derecha). Abreviaturas= eo: eófilo; hipe(c): hiperfilo cotiledonar; hipe (c):  
p
segmento proximal del hiperfilo cotiledonar; hipo(c): hipofilo cotiledonar; rc: rizoides del cuello; rp: raíz  
primaria. Escalas= 1mm.  
superaron 1 cm de longitud. La coloración adquirida observar que el extremo superior del eófilo  
y el tamaño alcanzado, permitieron identificarlas presentó coloración amarillo-pálido y mantuvo  
como plántulas completas y por lo tanto normales esta coloración a medida que se elongó, mientras  
(Fig. 4G). La etapa de desarrollo de plántula se dio que el resto del eófilo permaneció sin evidencia  
por finalizada dado el agotamiento de las reservas de pigmentos fotosintéticos (Fig. 5A). El hipofilo  
y la presencia de órganos fotosintéticos completos alcanzó una longitud máxima de 0,7 cm, mientras  
que sustentan el metabolismo y crecimiento de la que la longitud de la zona proximal del hiperfilo no  
planta.  
se vio afectada por la ausencia de luz. Otro efecto de  
Las semillas sembradas en oscuridad total la oscuridad fue que ambas estructuras presentaron  
produjeron plántulas totalmente etioladas al cabo de una coloración blanquecina-translúcida (Fig. 5B).  
los 11 días. Estas presentaron las mismas estructuras Se observó una mayor elongación del eófilo y un  
y secuencias que en la descripción anterior, aunque retraso en su emergencia de aproximadamente 48  
se observaron algunas alteraciones en cuanto al h, respecto de las semillas germinadas en presencia  
tamaño, coloración y tiempo de aparición, en de luz.  
relación con síntomas típicos de etiolación. Por  
En las semillas de 22 meses de almacenamiento  
ejemplo, desde momentos previos a la emergencia no se lograron identificar estructuras que  
del eófilo, la translucidez del cotiledón permitió evidenciaran una transición de semilla-plántula  
408  
M. C. Acosta et al. - Reproducción por semillas de Zephyranthes tubispatha  
Fig. 5. Plántula de Z. tubispatha cultivada en oscuridad. A. Hipofilo del cotiledón translúcido, que permite  
observar el eófilo (indicado con flecha). B. Plántula a 8 días desde la siembra. Abreviaturas= eo: primer  
eófilo; hipe (c): segmento proximal del hiperfilo cotiledonar; hipo(c): hipofilo cotiledonar; rp: raíz primaria.  
p
Escalas= 1 mm.  
completa durante los 11 días de seguimiento, tal Efecto del período de almacenamiento de semillas  
como fue descrita para semillas de 10 meses de sobre el comportamiento germinativo y el deterioro  
almacenamiento. Algunas de las semillas de 22 seminal  
meses de almacenamiento que lograron germinar  
Tanto las semillas con 0 meses de  
(
ver comportamiento germinativo en la próxima almacenamiento como las de 10 meses,  
sección) presentaron ausencia de algunas estructuras presentaron un T10 cercano a las 40 h, y  
y/o presencia de atrofias. Respecto a las estructuras, alcanzaron valores de %G alrededor del 100% al  
si bien se observó el crecimiento completo del cabo de 150 y 200 h, respectivamente (Fig.7A).  
hipofilo del cotiledón, hubo ausencia de desarrollo El valor de B, (tiempo en el que se produce el  
de los rizoides en el cuello y de crecimiento del 50% de semillas germinadas) fue de 68,74 h para  
eje embrionario, no registrándose alargamiento de las semillas con 0 meses de almacenamiento,  
la raíz primaria ni formación de eófilo. Acerca de mientras que para las de 10 meses fue de 97,14  
las estructuras atrofiadas, se observó durante la h, sin diferencias significativas (α ≥ 0,05).  
germinación una coloración castaña en el extremo Las semillas con 12 meses de almacenamiento  
del embrión emergente en el que se ubica el eje presentaron un T de 128 h (Fig.7A), un valor  
1
0
embrionario, indicando un posible daño (Fig. 6A, de B de 203,34 h (mayor que las de 0 meses de  
B). En algunas plántulas también se evidenció que almacenamiento, α ≤ 0,05) y recién a las 900  
el hipofilo del cotiledón presentó una coloración h se registró un 70% de semillas G (dato no  
verde-violácea, de mayor grosor y abierto en todo mostrado). Las restantes semillas no germinadas  
su largo (Fig. 6C). Este registro de estructuras se identificaron como M y F con valores de 9  
ausentes y/o presentes pero atrofiadas permitió su y 21%, respectivamente. Las semillas con 22  
clasificación como plántulas anormales.  
meses de almacenamiento alcanzaron un T10 a  
409  
Bol. Soc. Argent. Bot. 58 (3) 2023  
Fig. 6. Anormalidades en Z. tubispatha. A-B. Semilla germinada. C. Hipofilo del cotiledón atrofiado.  
Abreviaturas= hipe (c): segmento distal del hiperfilo cotiledonar (haustorio); hipo(c): hipofilo cotiledonar.  
d
Escalas= 1 mm.  
las 400 h (Fig. 7A) y el 50% de germinación  
La prueba de conductividad eléctrica mostró  
se registró alrededor de las 900 h (datos no que las semillas de 4 meses de almacenamiento  
mostrados). De las semillas no germinadas se presentaron una menor pérdida relativa de  
obtuvieron valores de 3 para %F, mientras que electrolitos que las de 18 meses. Los valores  
el resto se correspondió a %M. Las semillas con porcentuales de pérdida de electrolitos fueron,  
3
4 y 46 meses de almacenamiento alcanzaron del orden del 15% (± 0,8) y del 24% (± 0,8),  
valores 100 para %M. Por su parte, el valor respectivamente.  
de k osciló entre 2 y 5, sin que las diferencias  
La tinción con trifenil tetrazolio realizada a  
resultaran estadísticamente significativas (α ≥ embriones de semillas de 6 meses de almacenamiento  
0
,05).  
mostró coloraciones intensas y uniformes tanto  
410  
M. C. Acosta et al. - Reproducción por semillas de Zephyranthes tubispatha  
Fig. 7. A: Porcentaje de germinación acumulada de Z. tubispatha, de semillas de 0, 10, 12 y 22 meses  
de almacenamiento a temperatura ambiente. La flecha indica el inicio de la germinación. B: Embriones  
de Z. tubispatha teñidos con TZA procedentes de semillas de 6, 10 y 18 meses de almacenamiento a  
temperatura ambiente (de izquierda a derecha). Abreviaturas= a: anillo del hipofilo cotiledonar; hipe(c):  
hiperfilo cotiledonar; hipo(c): hipofilo cotiledonar. Escalas= 1mm  
en el hiperfilo como en el anillo y el hipofilo del ocasionalmente se registró ausencia de coloración  
cotiledón, predominando las tonalidades rosada, en la región haustorial (Fig.7B). Por el contrario,  
rojiza y ocasionalmente anaranjada. En algunos los embriones provenientes de semillas de 18 meses  
casos la región haustorial del hiperfilo se tiñó más de almacenamiento, presentaron mayoritariamente  
pálidamente (Fig.7B). Los embriones provenientes una coloración rosa tenue a blanquecina en el  
de semillas de 10 meses de almacenamiento, anillo e hipofilo del cotiledón, persistiendo sólo  
también mostraron una coloración uniforme en la tinción del hiperfilo, con tonalidades rojizas a  
todo el cotiledón que varió entre rosa y rojo. Solo anaranjadas (Fig. 7B).  
411  
Bol. Soc. Argent. Bot. 58 (3) 2023  
Efecto de la alta temperatura sobre la inicio como la velocidad de la germinación, en  
germinación de semillas producidas a fin de las semillas expuestas durante 9dHT se observó  
primavera y mediados de verano  
una tendencia opuesta (ej. Fig. 8), aunque sin  
La presencia de HT inhibió completamente diferencias significativas respecto del control  
la germinación en ambos grupos de semillas, (0dHT) en los parámetros de la función analizada  
resultando en un 100% de semillas F. Una vez (Tabla 1).  
transferidas a 20 °C, se registraron valores de  
%
G que superaron el 75%, aunque la dinámica Efecto de diferentes períodos de exposición de  
de la germinación varió dependiendo tanto de semillas a altas temperaturas, sobre el vigor de  
la longitud del pretratamiento a HT, como del las plantas obtenida  
momento en que se cosecharon las semillas (Fig.  
).  
Las plántulas obtenidas de los tratamientos  
0dHT, 9dHT y 30dHT al momento del trasplante  
8
En líneas generales, las semillas cosechadas presentaron similar aspecto entre sí y coincidente  
en enero (lote E21) presentaron menores con lo ya descrito para plántulas normales.  
valores de A que las de diciembre (lote D21), Luego de las 5 semanas de cultivo en todos  
independientemente del tratamiento térmico los tratamientos se alcanzaron altos valores de  
(
Tabla 1). El pretratamiento a HT aceleró la supervivencia que variaron entre un 85 y 90%,  
dinámica de la germinación en las semillas independientemente del tratamiento. Las mismas  
E21, siendo más marcado el efecto en aquellas también se identificaron como normales, ya que  
expuestas durante un período prolongado (v.g. presentaron todos los órganos completos, sin  
tratamiento 30dHT) (Fig. 8; Tabla 1). Por deformidades y similar morfología (coloración  
el contrario, en las semillas D21, si bien el verde de la porción aérea, hojas lineales, presencia  
pretratamiento 30dHT también aceleró tanto el de bulbo y raíces blanquecinas).  
Fig. 8. Porcentaje de germinación acumulada a 20 ºC de Z. tubispatha para semillas provenientes de  
diferentes momentos de semillazón y de diferentes periodos de exposición a 33 ºC. Abreviaturas= E21 y  
D21: semillas cosechadas en diciembre y enero 2021 respectivamente; 0dHT, 9dHT y 30dHT: indican el  
periodo de exposición de semillas incubadas a HT (33 ºC).  
412  
M. C. Acosta et al. - Reproducción por semillas de Zephyranthes tubispatha  
Fig. 9. Porcentaje de frecuencia relativa promedio (%FrH) de plantas de Z. tubispatha con 1, 2, 3 y 4 hojas  
(A, B, C y D, respectivamente) por cada tratamiento. Las letras diferentes dentro de cada cuadrante indican  
diferencias significativas (α≤0,05).  
Se observaron diferencias significativas por y PSs para plantas grandes (entre 3 y 4 mg, y  
categorías de tamaño para la mayoría de las 0,2 y 0,3 mg, respectivamente) triplicaron lo  
variables del crecimiento analizadas, siendo los alcanzado por las chicas. Las diferencias que se  
valores más altos para las plantas categorizadas observan entre los pesos de PSa y PSs se deben  
como grandes y medianas (Tabla 2). Sin embargo, principalmente a la formación de bulbos.  
no se detectaron variaciones significativas debidas  
Respecto al desarrollo, para todos los  
a la interacción tamaño x tratamiento ni tampoco tratamientos se observaron plantas con 1, 2, 3 o 4  
por efecto del tratamiento térmico (α ≥ 0,05). Los hojas, siendo la abundancia de plantas con 1 y 4  
mayores valores de %Fr lo alcanzaron las plantas hojas marginal (%FrH menor al 10% , Fig. 9A, D).  
categorizadas como medianas y grandes, con Para %FrH el tratamiento 0dHT obtuvo el mayor  
2
porcentajes promedio cercanos al 80% (± 4,5%) valor (60%, barras blancas Fig.9B); mientras que  
entre ambas. Respecto al Lt las plantas grandes para %FrH , si bien parecen ser valores mayores  
3
presentaron valores entre 6 y 7 cm, duplicando en los tratamientos 9dHT y 30dHT, lo que sugeriría  
los alcanzados por las plantas chicas (Tabla 2). un desarrollo más avanzado, no se diferenciaron  
Similarmente los valores registrados de PSa estadísticamente de 0dHT (Fig. 9C).  
413  
Bol. Soc. Argent. Bot. 58 (3) 2023  
Tabla 1. Valores promedio de B, A, K y del T , para semillas de Z. tubispatha provenientes de diferentes  
10  
momentos de semillazón y de diferentes periodos de exposición a alta temperatura. Los desvíos estándar  
están entre paréntesis. Letras diferentes dentro de cada columna indican diferencias significativas (α≤0,05).  
Abreviaturas= E21 y D21: semillas cosechadas en diciembre y enero 2021 respectivamente; 0dHT, 9dHT y  
30dHT: indican el periodo de exposición de semillas incubadas a HT (33 ºC).  
Momento de Período (días)de  
B (h)  
A (%)  
K
T10 (h)  
semillazón  
exposición a HT  
0
9
185,37 (9,9) c  
85,53 (24,7) ab  
48,26 (8,8) a  
95,27 (2,7) ab  
133,65 (1,5) bc  
44,1 (3,5) a  
87,72 (6,2)ab  
75,83 (6,8) a  
80,88 (4,5) a  
96,90 (6,3) b  
102,38 (12,9) b  
99,40 (1,3) b  
5,80 (1,7) bc  
3,66 (0,7) ab  
2,41 (0,5) a  
5,47 (0,9) bc  
4,09 (1,7) abc  
7,08 (0,7) c  
125,47 (10,8) c  
52,12 (20,5) ab  
21,27 (7) a  
E21  
30  
0
63,69 (6,7)bc  
72,73 (16,6) bc  
32,33 (3,2) ab  
D21  
9
30  
Tabla 2. Valores promedio de porcentaje de frecuencias relativa de plantas (%Fr) de Z. tubispatha y de  
las variables de crecimiento para cada tratamiento y categoría de tamaño. Los desvíos estándar están  
entre paréntesis. Letras diferentes dentro de cada columna indican diferencias significativas (α≤0,05).  
Abreviaturas= 0dHT, 9dHT y 30dHT: indican el periodo de exposición de semillas incubadas a HT (33 ºC).  
Lt: largo total de la parte aérea; Pss: peso seco subterráneo, y Psa: peso seco aéreo.  
Lt  
cm)  
Pss  
(mg)  
Psa  
(mg)  
Fr (%)  
(
Tamaño  
Grandes  
0dHT  
9dHT 30dHT 0dHT  
37,9 35,0 5,8  
4,5)a (9,3)a (6,3)a (0,4)a (1,2)a (1,8)a (0,2)a (0,2)a (0,2)a (0,1)a (0,1)a (0,1)a  
2,3 41,3 49,2 4,5 4,6 5,3 3,08 2,88 2,21 0,17 0,18 0,23  
4,0)a (8,1)a (11,4)a (0,6)b (1,1)b (1,3)b (0,2)b (0,2)b (0,2)b (0,1)b (0,1)b (0,1)b  
6,9 20,8 15,7 3,18 3,21 3,6 1,84 1,14 1,02 0,09 0,10 0,10  
8,1)b (11,5)b (11,6)b (0,6)c (1,6)c (0,4)c (0,2)c (0,2)c (0,2)c (0,1)c (0,1)c (0,1)c  
9dHT 30dHT 0dHT  
9dHT 30dHT 0dHT  
9dHT 30dHT  
30,7  
6,1  
6,97  
3,89  
3,99  
3,16  
0,23  
0,27 0,32  
(
(
(
4
Medianas  
Chicas  
2
diScuSión y concluSioneS  
autores, que las describen con forma redondeada u  
orbicular, aunque sí hay coincidencia en cuanto a la  
Las dimensiones aquí registradas sobre las descripción exomorfológica de las semillas (lisas y  
cápsulas de Z. tubispatha (0,7 cm ± 0,1) fueron negras brillantes). La coloración de las semillas ha  
menores en diámetro que las informadas para ésta sido relacionada con la presencia de fitomelanina,  
y otras especies del mismo género: por ejemplo, pigmento característico del tegumento seminal de  
para Z. tubispatha se mencionan valores de 1 cm de numerosas familias dentro del órden Asparagales  
diámetro, para Z. gracilifolia (Herb.) G.Nicholson (Meerow & Snijman, 1998; Simpson, 2006),  
de 1,5 a 1,8 cm, en Z. pedunculosa (Herb.) Nic. aspecto aún a investigar para este género. En  
García & S.C.Arroyo 1-1,5 cm y en Z. martinezii relación a la cantidad de semillas por fruto, aquí  
(
Ravenna) Nic.García 1-1,2 cm (Roitman & se registraron valores de aproximadamente el  
Hurrell, 2009). Cualitativamente las cápsulas doble o triple en comparación con lo registrado  
presentaron forma alargada u oblonga, con semillas por otros autores. Afroz et al. (2018) mencionan  
de escasa variabilidad en textura y color. La forma un valor promedio de 30 semillas por fruto, en  
de las cápsulas difiere a la mencionada por dichos plantas cultivadas de forma ex situ, mientras que  
414  
M. C. Acosta et al. - Reproducción por semillas de Zephyranthes tubispatha  
Fernández et al. (2011) indicaron un promedio y Z. tubispatha al subgénero Zephyranthes. Por  
de 54,4 semillas por fruto provenientes de flores lo tanto, las estructuras identificadas, aunque se  
autopolinizadas y de 51,1 semillas provenientes de consideraron como similares macroscópicamente,  
frutos de polinización cruzada. Cabe señalar que en deben ser analizadas más profundamente a fin  
estos últimos casos las plantas fueron cultivadas en de confirmar la extrapolación de la terminología  
condiciones de invernadero. Los altos valores aquí empleada. Por su parte, los subestadíos, del estado  
registrados de semillas por fruto, en parte podrían de desarrollo 0 de la escala BBCH extendida para  
deberse a que estos fueron colectados directamente monocotiledóneas comerciales (Meier, 2018) no  
de ambientes naturales, donde la floración ocurre en resultaría adaptable en el presente estudio, ya que,  
presencia de sus agentes polinizadores habituales y por un lado, la sucesión de eventos se plantea de  
por lo tanto podría inferirse una mayor eficiencia en manera diferente y por otro, señalan subestadíos  
dicho proceso.  
que aquí no se registraron. Ilustrando lo anterior,  
El endosperma de semillas de Z. tubispatha luego de la imbibición, ubican la emergencia y  
presentó la misma reacción que Z. bifida (Goyenetche crecimiento de la radícula seguido del crecimiento/  
et al., 2022) frente a las pruebas histoquímicas emergencia de cotiledones; mientras que en Z.  
realizadas. El peso de mil semillas fue menor que el tubispatha se registró primero la emergencia del  
registrado para especies emparentadas, tales como cotiledón, en relación con su crecimiento, y luego  
Z. bifida y Z. gracilifolia (Echeverría & Alonso, el de la radícula. Respecto a la emergencia de las  
2
010). Si bien no se hallaron trabajos donde se hojas la establecen en conjunto con la senescencia  
abordara éste último aspecto en Z. tubispatha, del cotiledón, mientras que aquí se registra solo la  
y podría ser considerado como propio de cada senescencia del haustorio en subestadios avanzados  
especie, es ampliamente conocida la influencia de la plántula y en conjunto con el crecimiento  
del ambiente sobre el número, tamaño y peso de del primer eófilo. Estos resultados destacan la  
semilla como así también en el tamaño de los importancia, por un lado, de desarrollar estudios  
frutos (ej. Delouche, 1980; Parciak, 2002; Jacobs específicos de desarrollo morfológico/anatómico,  
&
Lesmeister, 2012; Liu et al., 2017). La influencia ya que su desconocimiento puede llevar a cometer  
del factor genético merecería ser testeada más errores en la determinación de poder germinativo y  
profundamente en un amplio rango de condiciones otras valoraciones de la calidad de semillas. Por otro  
ambientales y en particular para el tamaño y peso lado, ahondar en procesos tales como el crecimiento  
de semilla, ya que son características importantes del eje embrionario, podrían contribuir a vislumbrar  
utilizadas para determinar la calidad de simientes mecanismos conservados y específicos de especies  
de plantas con flores (ISTA, 2010).  
(Steinbrecher & Leubner-Metzger, 2018).  
La descripción macroscópica de la  
Las plántulas cultivadas en luz, y categorizadas  
transición semilla-plántula se pudo concretar aquí como normales en subestadios avanzados de  
satisfactoriamente aplicando tanto la terminología Z. tubispatha, difieren visualmente con las de Z.  
general que emplea Tillich (2007) para indicar bifida (Steinbrecher & Leubner-Metzger, 2018)  
estructuras en monocotiledóneas, como la particular aparentemente por la pérdida de rizoides en su  
para embriones y plántulas de Z. bifida empleada cuello (tanto en presencia como ausencia de luz) y  
por Goyenetche et al. (2022). En Z. tubispatha, por la longitud alcanzada tanto por el hipofilo como  
se lograron establecer cinco subestadios según por la zona proximal del hiperfilo del cotiledón.  
eventos secuenciales: 1) imbibición, 2) emergencia Estas observaciones necesitan de mayores estudios  
del cotiledón, 3) crecimiento de la raíz primaria, 4) para ser confirmadas, dada su dependencia a las  
emergencia del eófilo y 5) senescencia del haustorio condiciones ambientales como la persistencia del  
y establecimiento de plántula. Para Z. bifida los collar de rizoides según la humedad ambiental y la  
eventos 3 y 4 fueron reportados como simultáneos longitud de estructuras por la condición lumínica. Las  
(Goyenetche et al., 2022). Queda por investigar, plántulas cultivadas en ausencia de luz presentaron  
ampliando el número de especies, si ésta diferencia un fenotipo etiolado típico, que se caracterizó por  
se relaciona con el hecho de que pertenezcan a falta de coloración verde y elongación de estructuras  
subgéneros distintos, Z. bifida se circunscribe al fotosintéticas, a excepción de la longitud de la zona  
subgénero Neorhodophiala Nic. García & Meerow proximal de hiperfilo que no presentó variación.  
415  
Bol. Soc. Argent. Bot. 58 (3) 2023  
Las plántulas de semillas almacenadas por termoinhibición en esta especie sería, en términos  
más de un año y medio revelaron ausencia de adaptativos, ventajosa para el establecimiento de  
ciertas estructuras y/o presencia de las mismas plántulas en las condiciones en que naturalmente  
pero atrofiadas. Esto sugiere que las semillas se encuentran sus poblaciones (Huo & Bradford,  
que germinaron, según criterio de emergencia 2015; Derakhshan et al., 2018). Dicha adaptación se  
del hipofilo del cotiledón, no desarrollaron el refiere a que el momento de producción de semillas  
eje embrionario y presentaron engrosamiento del coincide con temperaturas altas (primavera-verano)  
hipofilo del cotiledón, llevando a una ausencia tanto y con copiosas lluvias ocasionales, previniéndose  
de órganos fotosintéticos como del sistema radicular. o retrasándose la germinación por la presencia de  
En este sentido, la germinación no condujo a la termoinhibición, mientras que la disminución de  
producción de plántulas normales, aspecto a evaluar la temperatura hacia el otoño y el aumento de las  
por los test de calidad de semillas como el del poder precipitaciones crearían condiciones favorables  
germinativo, con lo que el seguimiento de los test en para la germinación, crecimiento y desarrollo  
Z. tubispatha debería extenderse hasta alcanzar el vegetativo de las plántulas (Yoong et al., 2016).  
subestadio de desarrollo 5.  
La efectividad de este mecanismo adaptativo se  
El almacenamiento de semillas de Z. tubispatha a evidenciaría para Z. tubispatha en la inhibición de  
temperatura ambiente mantuvo altos porcentajes de la germinación por temperaturas correspondientes  
germinación con bajos valores de B (tiempo medio a las estivales (como la alta temperatura aquí  
de germinación) dentro del primer año de cosecha, empleada), por su desinhibición cuando las  
en coincidencia con lo informado por Maza et al. temperaturas descienden en otoño (próximas a los  
(2004), pero contradictorios a los planteados por 20 °C) y por el mantenimiento del vigor y de una  
Afroz et al. (2018) donde señalan que las semillas alta supervivencia de las plántulas en época de  
pierden la viabilidad al cabo de tres meses. En otoño-invierno, luego de períodos largos (30 días)  
este último caso, si bien no se especifica cómo de permanecer termoinhibidas. Es así que este  
se conservaron las semillas durante ese período, mecanismo aplicado a programas de reproducción  
es probable que la diferencia se deba a que el daría la flexibilidad para elegir el momento de  
experimento se realizó sobre mezcla de suelo y siembra, ya que, aun disponiendo de agua, la  
compost, sin control de fotoperiodo y temperatura, germinación sólo se daría cuando las temperaturas  
lo que podría afectar la sobrevivencia, o bien debido estén por debajo de las temperaturas supraóptimas  
a la procedencia de las semillas (variación ambiental y sin pérdida de plantas ni de su vigor.  
y/o genética). A diferencia del seguimiento aquí  
Se espera que la información aquí recabada  
realizado, ninguno de estos autores reporta la pueda, por un lado, ampliar el conocimiento de  
aparición de plántulas anormales. La aparición de los factores a tener en cuenta para optimizar la  
plántulas anormales en semillas de más de un año y conservación y propagación mediante semillas  
medio podría estar asociada con un envejecimiento de esta especie y, por otro lado, contribuir  
natural de las semillas, reforzando esta idea con con herramientas complementarias, como las  
la disminución del porcentaje de germinación y descripciones morfológicas de semillas y de las  
retraso en el inicio y tiempo medio de germinación, primeras etapas del desarrollo, a discriminar entre  
que coinciden con los eventos señalados por la diversidad de especies que se circunscriben en el  
Bewley et al. (2013) para explicar la pérdida de subgénero Zephyranthes (García et al., 2019).  
viabilidad como producto del deterioro seminal por  
la edad. Por otro lado, los tests de trifenil tetrazolio  
y de conductividad eléctrica, también mostraron contribución de loS autoreS  
que, a partir de los 18 meses de almacenamiento, las  
semillas están deterioradas. En este sentido, resulta  
AMC, MVT  
y
CFH realizaron la  
interesante la posibilidad de utilizar estos tests para conceptualización general del manuscrito. MVT  
anticipar la pérdida en la capacidad de producir realizó las primeras descripciones de embriones y  
plántulas normales.  
plántulas de Z. tubispatha. AMC y AML realizaron  
En relación a las respuestas obtenidas luego de la ensayos experimentales y toma de datos. AMC,  
exposición a la HT, se interpreta que la presencia de AML, MVT y CFH realizaron registro fotográfico  
416  
M. C. Acosta et al. - Reproducción por semillas de Zephyranthes tubispatha  
de embriones y plántulas, AMC y CFH de AGUILAR-AVENDAÑO, O. E. 2016. La conformación  
pruebas histoquímicas. AMC realizó el análisis  
de datos y estructura general del trabajo. MVT  
y CFH realizaron supervisión general. Todos los  
autores participaron en la interpretación de datos,  
elaboración, redacción y revisión crítica del trabajo.  
de un nuevo instituto de investigaciones orientado a  
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